光纤型定量PCR仪荧光检测系统研究

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PCR技术,特别是荧光定量PCR技术(Quantitative Polymerase Chain Reaction, Q-PCR)实现了DNA片段体外快速扩增与精确定量的有机结合,在分子生物学领域具有举足轻重的意义。在生命科学、药物筛选以及疾病诊断方面得到广泛应用的Q-PCR仪近年来得到了长足的发展。本文对基于光纤的荧光检测系统进行了研究,并设计实现了其原型平台。本课题重点针对荧光检测系统中的激发光源与驱动、光纤导路、荧光检测模块三大部分进行了深入的分析和研究。首先从荧光光谱特性及定量手段入手,完成了激发光源的选型和大功率LED的驱动设计;接着在光学系统设计环节,以获得最佳耦合效率为目标,力求完善结构以有效匹配光学元器件的特性参数,在不同仿真手段组合所获得的数据指导下,设计并加工了一款耦合效率达76.32%的光纤光源和数值孔径为0.39的石英Y型光纤;作为光电转换和前期处理的重要模块,荧光检测组件部分的工作内容又包括了前置光电探测器、主放大电路以及低通滤波器的设计和选型,贯穿整个设计流程,在分析噪声源的基础上如何抑制噪声,提高信噪比成为了关注的重点,因此在选择运放、优化电路结构等方面都颇费心思。在完成上述各个子系统的设计基础上,本论文构建了整个光纤型荧光检测系统。为了对所设计的系统各项主要指标进行有效的评估,遵循相关的指导规范采用倍比稀释的罗丹明B甲醇溶液作为待测液,利用96孔机械扫描所得的荧光信号数据对检测系统的灵敏度、检测限和线性范围进行了分析和计算,结果显示,系统的灵敏度为6.374×1011mV/mol/L,检测限低达1.23×10-12mol/L,线性动态范围大于104,表明该系统的重要指标基本满足实际应用的要求。
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