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目的:髓源抑制性细胞（Myeloid Derived Suppressor Cells,MDSCs）是一群异质髓样细胞,存在于宿主体内,具有参与机体肿瘤免疫抑制的功能,表现出对CD8+和CD4+T细胞的抑制作用。经由MDSCs介导的免疫抑制作用的机制复杂多样,其中包括活性氧族途径（Reactive Oxygen Species,ROS）、诱导调节性T细胞（Regulatory T cells,Tregs）的产生、能量耗竭和抑制固有免疫等。此外,在临床上常以MDSCs进行靶点免疫治疗,其策略涵盖了促进MDSCs的分化、减少的MDSCs的数量、抑制MDSCs的功能。本研究通过体外实验探讨了丁香酚对原代的MDSCs及MDSCs细胞系MSC2的作用及作用机制,希望借此实验探索到能够用于免疫治疗的一种新的活性分子,并提供该活性分子的抗肿瘤机制的基础理论依据。方法:1.建立CT-26结肠癌细胞的小鼠皮下移植瘤模型,采用流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）检测荷瘤小鼠脾细胞悬液中MDSCs的比例,探讨丁香酚对原代MDSCs的抑制作用。2.使用细胞活性实验MTT法,检测丁香酚对MSC2、原代腹腔巨噬细胞、CT-26和MC-38等肿瘤细胞系的作用,并求出各自的半数抑制浓度(Half Maximal Inhibitory Concentration,IC50)。细胞爬片检测丁香酚对MSC2的作用。3.利用FCM检测丁香酚对MSC2的促凋亡效应,进一步采用蛋白质印迹法（Western Blotting,WB）检测丁香酚在不同时间点作用于MSC2细胞后,相关凋亡蛋白,如Bax,细胞色素C,Caspase-9,Caspase-8,Cleaved Caspase-3等的表达情况。4.实验后阶段,再次确立肿瘤皮下移植模型,利用FCM检测相关基因敲除小鼠(TLR4-/-)脾细胞悬液的MDSCs是否会受到丁香酚浓度变化的影响,初步是探寻丁香酚激活的信号通路,探究丁香酚在抗肿瘤过程是如何作用的。5.使用细胞活性实验MTT法,检测丁香酚对原代腹腔巨噬细胞、CT-26和MC-38等肿瘤细胞系的作用,并求出各自的半数抑制浓度(IC50)。结果:1.根据FCM结果,丁香酚具有降低荷瘤小鼠脾细胞悬液中MDSCs的比例的作用;2.MTT法细胞活性实验结果显示,不同浓度丁香酚处理MSC2后,细胞活力会随着刺激浓度的增加受到不同程度的抑制,表现为剂量-效应关系,在丁香酚浓度为0.3mΜ时具有统计学差异,并计算出MSC2细胞系的IC50为0.72mΜ。3.进一步行FCM细胞凋亡检测,用丁香酚处理后MSC2细胞,随后可观察到,随丁香酚刺激浓度的增加AnnexinⅤ染色阳性细胞的比例也会随之升高,呈剂量依赖性。用适宜刺激浓度的丁香酚处理MSC2,再根据WB检测相关凋亡蛋白的表达情况结果,检测到凋亡蛋白的表达量Bax,细胞色素C,Caspase-9,Cleaved Caspase-3会随着时间变化具有上调趋势,而BCL-2表达量有下调表现。4.丁香酚处理TLR4敲除荷瘤小鼠脾细胞,FCM检测发现丁香酚处理前后,MDSCs的比例无明显变化,无明显的统计学差异。5.用MTT法检测丁香酚对结肠癌细胞系和原代腹腔巨噬细胞的作用,其结果显示丁香酚在较高刺激浓度时才对MC-38、CT-26有抑制作用,计算出IC50分别为1.92mΜ,4.02mΜ。丁香酚处理原代腹腔巨噬细胞后,其吸光度值随着丁香酚浓度的增加而增强。因此在同样浓度范围内,丁香酚对腹腔巨噬细胞没有表现出抑制效应。结论:1.丁香酚可能通过与TLR4受体结合,触发内源性凋亡通路,诱导MDSCs凋亡,减少MDSCs的数量。2.丁香酚在一定浓度下可选择性抑制MDSCs。