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本研究采用超声波萃取、高氯酸溶液除蛋白、固相萃取技术净化、高锰酸钾衍生后利用高效液相色谱法检测,对乳粉中叶酸含量的检测方法进行了研究。旨在建立一种快速、准确检测乳粉中叶酸含量的新方法。通过对实验条件的探讨研究,建立了检测乳粉中叶酸含量的方法,其具体操作步骤如下:（1）样品前处理:准确称取乳粉样品5g（精确到0.0001g）于50mL锥形瓶中,加30mL去离子水（40～50℃）溶解,置于50℃超声波振荡器中进行超声萃取15min,再加入60%的高氯酸1.5mL沉淀蛋白质,沉淀完全后将溶液全部转移至50mL容量瓶中,加去离子水定容至刻度,摇匀,4000r/min离心15min,清液用滤纸过滤至锥形瓶中后放入0～4℃冰箱备用。（2）固相萃取净化:①先用5mL100%甲醇活化萃取柱,加入5mL水冲洗去甲醇,并使小柱平衡,上样前勿让填料流干;②取5mL样品清液加到柱床上,用Waters固相萃取仪控制流速在40d/min,使样品流过填料;③待样液全部通过固相萃取柱后,用6mL 1%的去离子水将干扰物洗出;④最后用5mL 100%甲醇洗脱,收集洗脱液,氮气吹干,保存备用。（3）衍生方法:用1mL水复溶经氮气吹干的样品,涡旋振荡使其全部溶解;向其中加1mL 0.2g/100mL高锰酸钾衍生剂、1mL 0.1mol/L的氢氧化钠和2mL去离子水,涡旋振荡使其充分混匀。然后放入60℃水浴加热40min。取出用自来水冲洗冷却,经涡旋振荡后用有机系针头式滤膜过滤到自动进样瓶中,上机备用。（4）色谱检测条件:色谱柱:BDS HYPERSIL C18（250×4.6 mm i.d.5μm）;柱温为30℃;检测器为荧光检测器,检测波长:Ex为285nm,Em为437nm;流动相为0.1mol/L磷酸二氢钠溶液;流速1mL/min;进样量20μL。在上述实验条件下,方法在0.005～1.5μg/mL范围内有良好的线性关系,相关系数可以达到0.9997,该方法的最低检出限为0.005μg/mL,定量限为0.017μg/mL。当添加浓度在40～100μg/100mg时,方法的平均回收率为89.9%～94.2%,RSD%为1.05～1.47%。实验结果表明,应用本方法检测婴幼儿配方乳粉中的叶酸,具有操作简单、精密度高、准确度好、容易推广等优点。方法可以满足乳品企业检测乳粉中叶酸含量的要求。