背景与目的卵巢癌因其发病隐匿，治疗效果一直欠佳，为死亡率最高的妇科恶性肿瘤。在美国每年约有23,000名新增病例，15,000名死亡病例[1]。卵巢癌的治疗主要依靠肿瘤细胞减灭术，术后给予以铂类药物为基础的联合化疗。但是化疗副作用以及化疗耐药的问题使得卵巢癌的预后仍然较差。在过去的30年里，其5年生存率仍不足40%[2]。因此寻找新的有效的治疗方案成为卵巢癌治疗急需解决的问题。研究发现信号通路调节的紊乱与异常是肿瘤发生、发展及化疗耐药的重要原因，其中mTOR信号通路与细胞的生长增殖尤其是肿瘤细胞的失控性增殖，肿瘤的复发转移及耐放化疗密切相关，多种恶性肿瘤包括乳腺癌、白血病、胃肠间质肿瘤、肝细胞癌、肺癌等均存在mTOR信号通路的失调[3-9]。而雷帕霉素靶蛋白mTOR，处于此条通路的中心环节，与蛋白质合成及细胞周期的调控密切相关[10]。因此针对于mTOR位点的特异性抑制剂成为肿瘤靶向治疗新的热点。雷帕霉素作为mTOR的特异性抑制剂，是从吸水性链霉菌发酵液中提取出的一种大环内酯类抗生素，最初发现其具有抗真菌作用，1989年被FDA批准作为免疫抑制剂应用于临床，近年来研究发现其具有显著的抗肿瘤作用[11]，联合传统化疗药物可明显提高化疗药物的促凋亡能力，增强肿瘤细胞对于化疗的敏感性[12]。顺铂是肿瘤化疗中最常用的化疗药物，是临床上实体肿瘤包括卵巢癌，化疗方案中最有效的药物之一，顺铂的抗肿瘤作用机制是与肿瘤细胞的DNA形成DNA-顺铂交联，引起DNA损伤，抑制DNA复制，促进细胞凋亡^[13]，雷帕霉素可抑制DNA损伤修复蛋白的合成，进一步促进顺铂的促凋亡能力。因此我们推测在卵巢癌细胞化疗时给予雷帕霉素可增加顺铂的抗增殖、促凋亡等抗肿瘤作用，增加肿瘤细胞对顺铂的化疗敏感性。本研究选用最常见的卵巢浆液性囊腺癌细胞株SKOV3，观察雷帕霉素联合顺铂对于细胞株增殖凋亡、周期分布的影响，初步探讨分子靶点药物与传统化疗药物联合应用的效果及相应的分子机制，寻求卵巢癌治疗更加有效的化疗方案。方法体外培养卵巢癌SKOV3细胞，MTT法检测雷帕霉素、顺铂单独及联合作用24h、48h、72h对细胞生长增殖的影响；FCM检测对于细胞凋亡及周期分布的影响；Western blot检测其对mTOR信号通路中PTEN、AKT、mTOR、p-mTOR、S6K蛋白及抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响。结果MTT结果显示：雷帕霉素单独作用可抑制细胞生长增殖，呈现明显的时间依从性，以72h抑制率最高，且各组之间两两比较均有统计学意义（P＜0.05）。联合顺铂时生长抑制率明显高于单独用药组，差异有统计学意义（P＜0.01）。合成指数CI＜1，表明两药联合应用有协同效应。FCM显示：雷帕霉素与顺铂单独应用即可促进细胞凋亡，凋亡率呈现明显的时间依从性，72h达到最大值；单用雷帕霉素凋亡率较低，且24h凋亡率与对照组比较无统计学意义（P＞0.05），其他各组与对照组比较均有统计学意义（P＜0.05），两药联合应用时其诱导凋亡能力明显增强。单用雷帕霉素作用24h可引起SKOV3细胞G1期延长，但与对照组比较无统计学差异（P＞0.05），S期与G2期细胞逐渐减少。随作用时间的延长，细胞G1期比例逐渐增加，联合顺铂作用效果明显高于单独用药组，各组与对照组比较均有统计学差异（P＜0.05）。Western blot结果显示：雷帕霉素作用可引起PTEN表达上调，mTOR、p-mTOR及Bcl-2表达下调；作用24h AKT表达上调，随着作用时间的延长（48h,72h），其表达逐渐下调；S6K表达无明显变化。各组与对照组比较有统计学差异（P＜0.05）。联合用药组上述蛋白表达与单用雷帕霉素组无明显差异。结论1雷帕霉素具有抗肿瘤作用，联合顺铂有协同效应，可增加传统化疗药顺铂的促凋亡能力，增强肿瘤细胞对于顺铂的化疗敏感性。2雷帕霉素单独及联合顺铂作用呈现明显的时间依从性，72h效果最明显。3雷帕霉素可能通过阻断mTOR信号通路，同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，引起细胞G1期阻滞，促进细胞凋亡，来发挥抗肿瘤及化疗增敏作用。