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目的:肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一。发病率高,发病隐蔽,早期诊断不足且易发生转移,80%的患者首诊时已属于中晚期。尽管诊断方法的进步、手术技术的提高、放疗化疗、靶向药物的应用在一定程度上提高了患者的生存率,但效果并不明显,因此有必要对肺癌生物学行为进行深入的研究。肿瘤细胞可以通过释放外泌体到周围环境中,从而对肿瘤微环境进行调控,目的在于形成对肿瘤生长、转移和侵袭有利的微环境。巨噬细胞作为肿瘤微环境中数量最多的炎性细胞,受肿瘤细胞的调控,可以表现出多样的作用。因此,本文的目的在于探讨肺癌来源的外泌体对巨噬细胞极化的作用,以及受外泌体作用后的巨噬细胞对肺癌的生物学影响,为进一步研究肿瘤的生物学行为提供了一定的基础研究。方法:收集肺癌细胞培养上清,培养上清经过超滤浓缩,用试剂法提取外泌体,并用透射电镜、纳米粒径对外泌体形态进行鉴定,用Westen blot对外泌体表面标志物进行鉴定;培养THP-1细胞,待细胞生长状态良好,用100 ng/ml PMA(佛波酯)作用2天,细胞贴壁,荧光定量PCR检测巨噬细胞标志分子CD68,以外泌体为媒介检测巨噬细胞吞噬功能;外泌体以200μg/ml浓度作用于贴壁巨噬细胞,qPCR检测与外泌体共培养24h的巨噬细胞表型分子INOS和CD163,化学发光法检测外泌体作用后巨噬细胞分泌蛋白IL-10、IL-6、IL-8表达情况;通过transwell小室共培养体系,将外泌体作用后的巨噬细胞与肺癌细胞共培养,24h胰酶消化共培养后的肺癌细胞,进行细胞侵袭实验检测肺癌细胞侵袭能力是否增强和荧光定量PCR检测侵袭、上皮间质转化标志分子MMP9、MMP2、E-cadherin表达情况。结果:通过透射电镜及纳米粒径分析得到直径为130 nm左右圆形的小囊泡,Westen blot检测得到CD9和CD63在提取的外泌体中高表达,说明我们成功从肿瘤细胞培养上清中分离得到了肿瘤外泌体;通过荧光定量PCR检测PMA诱导后的巨噬细胞高表达CD68分子,巨噬细胞吞噬实验发现外泌体可以被巨噬细胞吞噬,说明通过PMA诱导的巨噬细胞可用于接下来的实验;荧光定量PCR检测外泌体作用后的巨噬细胞INOS表达降低、CD163表达增高,化学发光检测外泌体作用后的巨噬细胞分泌的IL-10、IL-6、IL-8均增加;细胞侵袭实验发现与受外泌体作用的巨噬细胞共培养的肺癌细胞高表达MMP9、MMP2和E-cadherin。结论:1、肺癌细胞来源的外泌体可以诱导巨噬细胞极化,不为单一表型,而是M1和M2型都有的混合型,且M2型更多。2、肺癌通过自身分泌的外泌体能够通过调节微环境中的巨噬细胞,形成有利于自身侵袭转移的微环境,进一步增强自身的侵袭转移能力。