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目的:构建胆总管结扎模型来诱导胆汁淤积性肝纤维化,探究结缔组织生长因子(CTGF)在大鼠胆总管结扎模型诱导的胆汁淤积性肝纤维化中的表达。方法:从同济医学院实验动物中心购买12只雄性SD大鼠(体重200g±10g)。通过胆总管结扎(BDL)模型来诱导胆汁淤积性肝损伤。利用H&E染色评价胆汁淤积模型的构建,利用天狼猩红染色,羟脯氨酸水平检测,免疫组织化学,western blot,q RT-PCR等方法评估肝纤维化水平。CTGF在肝组织内的表达水平通过免疫组织化学,western blot,q RT-PCR来检测。结果:BDL诱导胆汁淤积性肝损伤模型构建成功,胆总管结扎后4周引起了明显的肝纤维化,并导致肝内CTGF表达水平升高,且CTGF主要表达在肝细胞内。结论:CTGF在大鼠BDL引起的胆汁淤积性肝纤维化的肝内表达水平增高,且主要表达在肝细胞内。目的:探究结合性胆汁酸对肝细胞内CTGF表达的调控及其调控机制。方法:选取小鼠AML12和大鼠BRL肝细胞,用结合性胆汁酸刺激后通过western blot,q RT-PCR,含有CTGF启动子序列片段的荧光素酶报告基因检测CTGF的表达情况。通过western blot去探索哪些信号通路可以被结合性胆汁酸激活,同时联合相关信号通路的抑制剂及si RNA干扰相关信号通路来探究哪些信号通路参与结合性胆汁酸对于CTGF表达的调控机制。利用免疫组织化学,western blot和q RTPCR在BDL和Sham组大鼠肝脏组织内进一步验证相关信号通路的活性。结果:结合性胆汁酸可以促进小鼠AML12和大鼠BRL肝细胞内CTGF的合成。此外利用western blot发现结合性胆汁酸可以激活AML12和BRL肝细胞内的ERK,Akt,p38 MAPK及YAP信号通路,但是不能激活JNK和TGFβ/Smad信号通路。而使用ERK活性抑制剂U0126和YAP活性抑制剂Verteporfin(VP)后可以抑制结合性胆汁酸对于CTGF的上调作用。此外,U0126可以部分抑制YAP的表达及结合性胆汁酸对于YAP的调控,但是YAP活性抑制剂却不能影响ERK活性。利用免疫组化,western blot等进一步证实了在BDL模型中ERK,YAP表达水平增高,同时它们在肝细胞内的表达存在一定程度的共定位。此外,当使用Akt信号通路抑制剂MK2206不仅可以增强结合性胆汁酸对于CTGF的上调同时也能上调AML12和BRL肝细胞内CTGF的基础表达量,说明Akt信号通路在生理状态下可以抑制CTGF的表达。此外我们还发现使用Akt活性抑制剂MK2206可以增加ERK信号通路的活性及YAP的表达量,反过来,U0126和VP对于Akt信号通路的活性没有影响。结论:结合性胆汁酸通过ERK/YAP信号通路调控CTGF在肝细胞内的表达,同时结合性胆汁酸激活的Akt信号通路通过拮抗ERK及YAP从而抑制CTGF的表达。