荷兰水仙基腐病病原菌生理小种的鉴定及植株保护酶系统与抗性关系研究

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荷兰水仙是世界著名球根花卉,观赏价值很高,目前国内所需种球主要从荷兰进口。由于地理、气候等诸多因素影响,在各引种地区,荷兰水仙病害尤其是基腐病较为严重,为此,本试验对水仙基腐病致病菌做了较为全面的研究,且比较了感病对植株的影响,以及不同品种健康植株间的酶活性。得到如下结果:第一,从不同水仙品种感病种球中分离病原菌,运用传统的形态特征观察法进行鉴定,分别从Marieke、Mount hood、Giant star和Pinza中分离出F40、BO、GO和ZO 4个形态各异的尖镰孢菌水仙专化型(Fusarium oxysporum f. sp. narcissi)生理小种。第二,病原菌不同碳水化合物代谢研究表明,各个生理小种对不同种类的碳水化合物代谢能力有差异,F40的发酵和同化能力最弱,其次是ZO,BO的代谢能力最强。发酵试验中,4个菌株发酵可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖时都能够产酸产气;发酵D-木糖、L-鼠李糖、D-半乳糖均只能产酸;在发酵D-果糖、麦芽糖、乳糖、海藻糖、纤维二糖时4个菌株表现不一致,有的菌株发酵产酸产气,而有的只能发酵产酸。不同碳源同化试验中所有的菌株都呈现阳性反应,但是与除了鼠李糖和乳糖之外的糖类相比,菌株对醇类的代谢能力相对弱。第三,采用Nested-PCR技术,对分离出的水仙尖镰孢菌28S rDNA进行分析。经过两对引物的扩增,先后得到750 bp和400 bp的DNA片段,测序后进行多序列比对分析并构建系统发育树,结果表明F40是相对原始的菌株。传统鉴定方法和Nested-PCR检测方法都鉴定出4个尖镰孢菌。结果表明分子鉴定方法是一种更为理想的鉴定和检测的现代技术方法。第四,为了揭示荷兰水仙保护酶系统在病菌胁迫下的变化趋势和协同性,测定了自然感病状态下,不同感病程度Mount hood植株叶片中过氧化氢酶(CAT),过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,比较分析了致病菌对荷兰水仙保护酶系统的影响。结果表明,与健康植株相比,感病植株上未感病叶片SOD活性能相对稳定地保持在较高水平,而POD和CAT活性较低;感病植株轻度感病和重度感病叶片酶活性均呈现不同程度的上升,其中POD活性上升1.3-2.0倍,CAT活性上升1.5-1.8倍,SOD活性上升3.0-3.5倍;病株重度感病区三种酶活性均高于轻度感病区。第五,POD和SOD能够作为植物抗性的指标,不同荷兰水仙品种POD、CAT和SOD活性测定结果表明,早花品种Delibes、上农早春和Pinza相比较,Pinza的抗性相对弱;晚花品种Sovereign和Mount hood相比较,Mount hood的抗性相对弱。该结论为栽培品种的选择提供了科学指导。
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