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第一部分风湿性心脏病合并房颤患者心房组织组蛋白去乙酰化酶SIRT1表达与心房纤维化的相关性研究目的通过观察房颤患者心房肌组织SIRT1的表达情况、心房肌纤维化的程度,SIRT1与心房纤维化的相关关系,了解房颤患者心房肌组织SIRT1的表达及其与心房纤维化的相关性,并通过检测心房肌组织p53蛋白的表达情况,了解房颤患者心房肌组织SIRT1表达参与房颤及心房纤维化的可能机制。方法选择38例行心脏手术的风湿性心脏病患者,按照是否合并房颤分为两组：持续性房颤组25例(AF组),其中女性14例,男性11例,年龄范围31-68岁,平均年龄(47.11±8.82)。患者的房颤持续时间为6个月～11年,平均持续时间(5.26±1.54)年。窦性心律组15例(SR)组,其中女性9例,男性6例,年龄范围33-57岁,平均年龄48.24±5.23岁。所有患者手术前均行心脏超声评价心脏结构情况；所有标本均来源于行心脏手术患者的右心耳组织。按照Trizol步法的步骤提取右心耳组织的总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测SIRT1mRNA在心房组织的表达；采用免疫组化法检测SIRT1蛋白、p53蛋白在心房组织的表达,采用masson染色评价心房纤维化程度。结果判定：实时荧光定量PCR法检测SIRT1mRNA结果：用比较阈值法测定目的基因的相对表达量。SIRT1、p53免疫组化检测结判断：阳性着色定义为心房肌细胞着色部位在胞核和胞浆,以心房肌细胞核为主；阴性着色定义为心房肌细胞无明显着色,部分心房肌细胞胞浆可呈现浅棕色；蛋白表达量=胞核阳性的细胞数／细胞总数(%)(每个标本均随机选取5个高倍镜视野进行测量,取其均值)。Masson染色评价心房组织纤维化程度：采用胶原半定量分析计算胶原容积分数,该值代表心房纤维化程度。心房组织切片的光镜拍片显示正常胶原纤维为蓝色,变性胶原纤维为白色,心房肌组织为红色。应用医学图像分析系统,计算胶原容积分数-胶原纤维／视野面积(%)(每个标本均随机选取5个高倍镜视野进行测量,取其均值)。比较两组患者SIRT1mRNA及蛋白表达情况、p53蛋白表达情况、心房纤维化程度,分析SIRT1表达与心房纤维化的关系,SIRT1表达与p53蛋白表达的关系。结果1.两组患者心房纤维化程度比较可见AF组纤维化程度更明显,AF组胶原容积分数明显高于SR组,差异有统计学意义(p<0.05)。2.两组患者心房组织均可见SIRT1mRNA表达,其中AF组患者SIRT1mRNA表达高于SR组,差异有统计学意义(p<0.01)。3.两组患者心房组织均可见SIRT1蛋白表达,其中AF组患者SIRT1蛋白表达高于SR组,差异有统计学意义,(p<0.01)。4.两组患者心房组织均可见p53蛋白表达,其中AF组患者p53蛋白表达高于SR组,差异有统计学意义(p<0.05)5.SIRT1表达量与心房结构的相关性分析研究：将AF组SIRT1mRNA及蛋白表达量分别与左房、右房内径行相关分析,发现SIRT1表达与心房内径无明显相关性,其相关系数分别为：r=0.198,r=0.047(左房),r=0.027,r=0.096,p均>0.05(右房)。6.SIRT1表达量与心房纤维化的相关分析研究：将AF组SIRT1mRNA及蛋白表达量分别与心房纤维化容积分数行相关分析,发现SIRT1mRNA及蛋白表达量与心房纤维化容积分数均呈负相关,r=-0.643,r=-0.721,p均<0.05。7.SIRT1表达量与P53相关性分析研究：将AF组SIRT1mRNA及蛋白表达量分别与p53进行相关分析,发现SIRT1mRNA及蛋白表达量与p53无明显相关性,r=0.163,r=0.069,p>0.05。8.SIRT1表达量与房颤持续时间相关性分析：将AF组SIRT1mRNA及蛋白表达量分别与房颤持续时间行相关分析,发现SIRT1mRNA及蛋白表达量与房颤持续时间呈负相关,r=-0.749,r=-0.601,p均<0.05。结论房颤患者心房组织SIRT1表达有所增加,随房颤持续时间的延长,SIRT1表达呈下降趋势,SIRT1表达与心房纤维化呈负相关,与p53表达无明显相关性,提示SIRT1高表达可通过抑制心房纤维化,抑制房颤的进展,该保护作用随房颤持续时间的延长而逐渐减弱。创新点与局限性1.本研究采用在体心房组织检测SIRT1的mRNA及蛋白表达,试验对象比较新颖。2.本研究针对SIRT1与风湿性心脏病合并的房颤的相关性进行研究,既往未有相关报道。3.本研究发现风湿性心脏病合并房颤患者心房组织SIRT1表达高于窦性心律患者。4.本研究发现SIRT1表达与心房纤维化呈负相关,可抑制心房纤维化程度,并且该抑制作用随房颤持续时间的延长而减弱。5.本研究发现SIRT1表达与p53无明显相关性。本研究不足之处在于只对风湿性心脏病患者的SIRT1表达进行研究,结果有局限性。本研究未阐明SIRT1抑制心房纤维化的具体机制,及SIRT1与房颤关系的具体机制,可在将来的动物试验中进一步研究。第二部分高血压合并房颤患者外周血单个核细胞组蛋白去乙酰化酶SIRT1表达与氧化应激及炎症相关性研究目的观察高血压合并房颤患者外周血单个核细胞SIRT1的表达情况,以及外周血氧化应激指标、hsCRP水平,了解房颤患者SIRT1表达及其与氧化应激及炎症因子的关系。方法选择2011年1月至2011年12月住院的高血压病合并房颤患者58例作为试验组。按照房颤的类型分为两组：持续性房颤组33例(AF1组),持续性房颤指房颤持续时间超6个月,年龄范围45～83岁,平均年龄57.38±6.53岁。房颤持续时间为7个月～13年,平均时间3.58±1.07年。阵发性房颤组25例(AF2组),阵发性房颤指房颤发作呈阵发性,每次发作时间低48小时,年龄范围37～69岁,平均年龄56.35±5.68岁。对照组：选择2011年1月至2011年12月住院的高血压合并窦性心律患者30例,设为窦性心律组(SR),年龄范围35～78岁,平均年龄52.43±9.37岁。记录研究组所有患者的一般资料,包括年龄、性别、病史等情况。并分组整理。所有患者抽取静脉血,采用实时荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞SIRT1mRNA表达情况,用硫代巴比妥酸法测定外周血中丙二醛(MDA)含量,采用免疫比浊法测定高敏C反应蛋白(hsCRP)含量。分析SIRT1在房颤患者外周血的表达情况,及其与氧化应激指标、hsCRP的相关性。结果1.三组患者单个核细胞均可见SIRT1表达,其中AF2组表达高于其他两组,差异有统计学意义,p<0.01,AF1组与SR组比较有增高趋势,但差异无统计学意义。p>0.05。2.各组氧化应激指标(MDA)结果：AF1组MDA含量高于SR组,差异有统计学意义,p<0.01,AF2组MDA含量与SR组比较无明显差异p>0.05,组间比较可见AF1组MDA含量高于AF2组,差异有统计学意义,p<0.01。3.各组hsCRP水平比较：AF1组hsCRP含量高于SR组,差异有统计学意义,p<0.01,AF2组hsCRP含量与SR组比较有增高趋势,但无统计学意义,p>0.05,组间比较可见AF1组hsCRP含量高于AF2组,差异有统计学意义,p<0.01。4.各组SIRT1表达与MDA相关性分析结果显示：AF1组SIRT1表达与MDA呈负相关,相关系数为rs=-0.416,p<0.05。AF2组SIRT1表达与MDA呈负相关性,相关系数为rs=-0.641, p<0.01。SR组SIRT1表达与MDA无相关性,相关系数为r=0.034,p>0.05。5.各组SIRT1表达与hsCPR相关性分析结果显示：AF1组SIRT1表达与hsCPR无相关性,相关系数为rs=0.027,p>0.05。AF2组SIRT1表达与hsCPR无相关性,相关系数为0.004,P>0.05。SR组SIRT1表达与hsCPR无相关性,相关系数分别为rs=0.007,p>0.05。6.SIRT1表达与房颤持续时间相关性分析：将AF1组SIRT1表达量与房颤持续时间行相关性分析,结果显示SIRT1表达量与房颤持续时间呈负相关,rs=-0.834,p<0.01。结论高血压合并房颤患者外周血单个核细胞可见SIRT1表达增加,其中阵发性房颤患者增加明显,持续性房颤患者有增加趋势,而且随房颤持续时间的延长逐渐下降,SIRT1表达与外周血氧化应激水平呈负相关,与hsCRP无明显相关性,提示SIRT1可通过抑制氧化应激抑制房颤的进展,在房颤中起作用。创新点及局限性1.本研究主要检测高血压患者外周血单个核细胞中SIRT1的mRNA表达,研究对象有创新性。2.本研究针对SIRT1与高血压合并的房颤的相关性进行研究,既往未有相关报道。3.本研究发现高血压合并房颤外周血单个核细胞SIRT1表达高于窦性心律患者,特别是阵发性房颤的患者。4.本研究发现SIRT1表达与氧化应激程度呈负相关,可抑制氧化应激程度,并且该抑制作用随房颤持续时间的延长而减弱。5.本研究发现SIRT1表达与hsCRP无明显相关性。本研究不足之处在于未对SIRT1在房颤中的具体作用机制做更加深入的研究,结果有局限性。