论文部分内容阅读
背景和目的: 食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,男性食管癌的发病率在世界上居恶性肿瘤的第六位,在发展中国家为第四位,中国是世界上食管癌高发地区。对于早期有希望治愈的患者,首选手术或放射治疗。由于食管癌的症状出现较肿瘤的实际进展晚,当患者有吞咽困难的食管阻塞症状就诊时多属中晚期癌,确诊时有80%的患者已无根治性切除指证,主要靠放射治疗或其它综合治疗。食管癌预后无论是外科还是放射治疗都较差,治疗后5年生存率一般不超过30%。食管癌淋巴结转移非常多见,是其主要特点之一。即使癌限于黏膜下层的早期食管癌,切除标本淋巴结转移也可达40%~50%。本实验利用人食管癌原发灶和淋巴结转移灶的新鲜手术标本建立食管癌相应的Scid小鼠移植瘤,并对其基本生物学特性进行鉴定,对食管癌淋巴道转移机机制进行初步的探讨。为今后食管癌研究提供基本工具和平台。 方法: 用人食管鳞癌手术新鲜标本移植于Scid小鼠皮下。原代移植成功后,于Scid小鼠间反复连续传代。传代相对稳定后检测移植瘤的相关生物学特性:进行大体形态学,光镜、电镜、流式细胞分析周期分布和染色体分析;用免疫组化技术检测转移相关蛋白P53、MMP2、E-Ca、CD44、VEGF、VEGF-C、VEGFR-3、nm23、及PCAN表达情况。移植瘤组织冻存复苏再次接种于Scid小鼠皮下,观察致瘤情况。并每代进行体外组织原代培养。 结果: 从12例食管癌手术患者中取得食管癌组织移植于Scid小鼠皮下,历时24个月,两例获得成功,一例来自于患者食管原发灶,标记为EC-1,已经稳定传代15代;另一例来自于食管癌淋巴结转移灶标记为 EC-11,已经稳定传代22代;均为食管鳞癌。并对其生物学特性进行了研究,分别来自原发灶和淋巴结转移灶移植瘤表现出不同的生物学特性: ①EC-1潜伏期较长,平均潜伏期为20天,荷瘤成活时间长,最长荷瘤成活时间为156天;而EC-11潜伏期短,平均潜伏期为12天,荷瘤成活时间较短,最长荷瘤成活时间为65天。 ②EC-11较EC-1生长速度快,部分有浸润现象表现出更强的侵袭性。 ③PCAN和P53在两个瘤株均高表达;CD44、VEGF、VEGF-C、VEGFR-3、MMP2在EC-11中表达较EC-1高,而E-Ca、nm23在EC-1中表达较EC-11高;从免疫组化的结果来看EC-11表现出更强的转移潜能。两瘤株均生长稳定,传代成功率高(100%),并冻存复苏后仍能成瘤,成瘤率为69%;病理学检查显示保持原人食管鳞癌的特征,染色体分析显示为人癌染色体特点。 结论: 利用人食管癌原发灶和淋巴结转移灶成功建立相应Scid小鼠移植瘤动物模型。对其基本生特学特性进行了对比研究,两瘤株均为人食管鳞癌,生成稳定,传代成功率高(100%),冻存复苏后仍能成瘤,染色体分析均显示为人癌染色体特点。来自淋巴结转移灶瘤株比来自原发灶瘤株表现出更强的生长能力。转移相关蛋白检测结果提示来自淋巴结转移灶瘤株有更强的转移潜能。移植瘤的建立为今后食管癌的研究提供了动物模型。