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本论文包括两章内容。第一章为桑蚕对马尾松毛虫质型多角体病毒的敏感性研究。用虫体克隆技术,对马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株进行了分离纯化,鉴定其为1型质多角体病毒。以家蚕春蕾×镇珠杂种F1、F2代二龄起蚕进行毒力试验,同时用家蚕1型质多角体病毒为对照。结果表明:马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株能引起蚕儿发病,但毒力小于家蚕质型多角体病毒且差异显著;马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株感染家蚕试验种F1和F2代幼虫28天后的半致死剂量(LD50)分别为885和18 CPB(质多角体),前者为后者的49倍,说明F2代家蚕幼虫较F1代对该病毒更为敏感。马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株感染后的家蚕,其结茧率、化蛹率、羽化率、全茧量、茧层量和单蛾产卵数均有所下降;F2代、F1代羽化率与病毒感染剂量成负相关,且分别达显著和极显著水平;全茧量、茧层量、茧层率、单蛾产卵数与病毒感染剂量无显著关联。 第二章研究内容为马尾松毛虫质型多角体病毒基因组中S6,S7和S10cDNA克隆、序列分析及S7cDNA部分序列的原核表达。基因组中dsRNA片段经RT-PCR反应得到目的cDNA,与克隆载体连接后,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,阳性克隆经酶切、电泳鉴定后测序。研究结果表明:基因组第10片段(S10)cDNA含有944个核苷酸,编码分子量为28.5kD,由248个氨基酸组成的多角体蛋白;在正链的第1-5核苷酸与第680-684核苷酸处含有反向重复序列,即5’-AGTAA-3’和5’-TTACT-3’,提示其5’末端序列与内部序列可以形成较为复杂的二级结构。DpCPV-HN S10与BmCPV-1 S10相比较,核苷酸序列同源性为91.2%,多角体蛋白氨基酸序列同源性为98.0%。DpCPV两个毒株(江西株与湖南株)多角体蛋白基因的开放阅读框序列共有6个核苷酸位点发生替换,仅导致多角体蛋白氨基酸序列1个位点发生替换即江西株LyS209一湖南株挪209,它们分别由 AAA和 AGA编码。S7 CDNA含有1501个核昔酸,编码分子量为49.8 l,由448个氨基酸组成的多肽p50,氨基酸序列中含一个核定位信号,与 Mycophalna hominis的 DnaK样蛋白具有序列相似性。DpCPV-HN S7与BmCPV4 的核着酸序列同源性为 87刀%,编码的氨基酸序列同源性为 92.8%。S6 OM由 1686个核苦酸组成,编码分子量为 63.7 o,含有 561个氨基酸的多肽 p64,氨基酸组成中有较高的亮氨酸含量10 0%),氨基酸序列中各含一个亮氨酸拉链结构和 ATP/GTP结合位点,具有两个核定位信号,预示其可能具有与核酸结合的活性,在病毒复制中起重要作用小64与 RRSV Pns7蛋白具有序列相似性。DpCPV-HN S6与 BmCPV刁S6相比,核着酸序列同源性为837%,编码的氨基酸序列同源性为92.5%。 对编码p50C259的CDNA序列进行克隆,构建成融合基因表达载体pET上 人),转化至BLZI中,用IPTG进行诱导表达,得到分子量约为 37.3 kDa的融合蛋白,它比根据氨基酸序列预测的 329 kDa要大。对表达条件进行了优化,当用 10mmoffe IPTG诱导Zh,表达量取得较好的效果。