【摘 要】
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虾青素属于类胡萝卜素物质,是天然存在于某些微藻中的海洋活性物质。虾青素是多烯类结构,具有强抗氧化性,并且具有抗肿瘤、改善糖尿病和增强免疫力等功效。虾青素既有亲水性,又有亲脂性,可自由穿透线粒体膜,作用于线粒体。活性氧的大量产生会导致细胞线粒体损伤。线粒体损伤途径是细胞凋亡的重要途径之一。线粒体功能障碍引起的细胞凋亡信号在发生肾脏细胞凋亡和乳腺癌细胞凋亡过程中起关键作用。线粒体膜电位是维护其物质平衡
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虾青素属于类胡萝卜素物质,是天然存在于某些微藻中的海洋活性物质。虾青素是多烯类结构,具有强抗氧化性,并且具有抗肿瘤、改善糖尿病和增强免疫力等功效。虾青素既有亲水性,又有亲脂性,可自由穿透线粒体膜,作用于线粒体。活性氧的大量产生会导致细胞线粒体损伤。线粒体损伤途径是细胞凋亡的重要途径之一。线粒体功能障碍引起的细胞凋亡信号在发生肾脏细胞凋亡和乳腺癌细胞凋亡过程中起关键作用。线粒体膜电位是维护其物质平衡,保证肾脏细胞和乳腺癌细胞正常活动的必须,线粒体膜电位的下降或消失会导致肾脏细胞凋亡和乳腺癌细胞死亡。为了探究虾青素是否能有效改善高糖诱导的大鼠肾脏细胞凋亡及具体抗细胞凋亡的作用机制。采用CCK8法测定正常糖和高糖环境下,不同浓度的虾青素对HBZY-1细胞活力的影响。运用相关试剂盒测定死活细胞比例和细胞凋亡的变化。观察在光镜下的HBZY-1细胞形态。运用Caspase3/7活细胞荧光实时法检测HBZY-1细胞中Caspase3/7活性。运用Western Blot技术检测HBZY-1细胞中促细胞凋亡蛋白Bax、抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。结果发现虾青素有效逆转高糖引起的细胞活力降低,抑制高糖引起的HBZY-1细胞凋亡和形态异常,改善线粒体膜电位和参与调控HBZY-1细胞中凋亡相关蛋白。本研究证实虾青素可以逆转高糖引起的HBZY-1细胞膜电位的降低,抑制高糖引起的HBZY-1细胞凋亡。虾青素可能成为改善糖尿病肾病发生发展的治疗物质。虾青素不仅抑制高糖诱导的HBZY-1肾小球系膜细胞凋亡,还促进肿瘤细胞MDA-MB-231细胞死亡。采用CCK8检测法和死活细胞染色法对MDA-MB-231细胞进行体外细胞活力测定。运用TUNEL/DAPI试剂盒、Annexin V-FITC试剂盒与细胞骨架染色剂深入探究虾青素对MDA-MB-231细胞进行体外细胞活力测定。运用Mitosox探针和JC-1探针观察表明,虾青素会导致MDA-MB-231细胞线粒体活性氧、线粒休膜电位下降和线粒体形态学的改变。免疫荧光染色法检测MDA-MB-231细胞中Nrf2易位。运用Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase 3的表达,分析Nrf2/HO-1/Keap l/Connexin 43的表达水平。通过本课题实验研究发现虾青素通过调控 Bcl-2/Bax/Caspase 3/Connexin 43/Nrf2/HO-l/Keap 1 的表达,从而降低MDA-MB-231细胞内ROS的生成,诱导MDA-MB-231细胞凋亡,最终导致MDA-MB-231细胞死亡。研究结果提示虾青素可能成为一种潜在的抗乳腺癌的活性物质。
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