论文部分内容阅读
目的:Autotaxin (ATX)广泛表达于正常组织和肿瘤组织中以及多种生物体液中,参与多种生理和病理过程,近年来ATX的结构与功能得到了较为广泛的研究。为了进一步了解ATX在肾细胞癌和膀胱癌发生发展中的作用,本研究探讨ATX在肾细胞癌和膀胱癌的表达及其临床意义,有可能为肾细胞癌和膀胱癌的早期诊断及治疗提供理论依据。方法:选取肾细胞癌70例、膀胱癌标本43例及其相应的癌旁正常组织作为研究对象,采用免疫组化SABC法检测ATX在不同病理类型的肾细胞癌、膀胱癌及其相应癌旁正常组织中的表达水平,运用Image-Pro Plus6.0图像分析软件测定免疫组化图像的累积光密度值,结合临床病理数据,分析其与肾细胞癌、膀胱癌临床病理特征之间的关系。采用Western Blot检测在肾细胞癌组织、膀胱癌组织以及相对应的癌旁正常组织中ATX蛋白的水平表达,以β-actin作为内参照,应用压片法对化学发光胶片进行信号检测。同时收集肾细胞癌、膀胱癌患者和正常人的外周血血清标本分别为56例、53例、60例,采用ELISA法检测正常人和肾细胞癌、膀胱癌患者的外周血血清中ATX的蛋白表达水平。利用LPC作为底物,ATX催化反应释放出胆碱,定量检测正常人和肾细胞癌、膀胱癌患者外周血血清内LysoLPD酶活性。结果:1、免疫组织化学研究结果显示:相对于肾细胞癌癌旁正常组织,ATX在肾细胞癌组织中高表达,ATX在癌旁正常组织和癌组织中的累积光密度值分别是13158.77±4016.40和17079.28±3544.62,两组间差异有统计学意义(P<0.05), ATX在不同病理类型肾细胞癌的表达差异没有统计学意义(p>0.05),但是随着临床分期及病理分级的增高,ATX蛋白的表达呈递增趋势,差异具有统计学意义(P<0.05);与患者性别、年龄和肿瘤大小各组无明显差异,无统计学意义(P>0.05)。同样,相对于膀胱癌旁正常组织,ATX蛋白在膀胱癌组织中呈高表达,累积光密度值分别为8952.63±1213.54和10833.41±1782.76,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。2、Western Blot检测结果显示:ATX蛋白在肾细胞癌、膀胱癌及其相应癌旁正常组织中均有表达,大约在100kDa左右位置可见清晰条带。在肾细胞癌癌组织和癌旁正常组织中ATX条带灰度值为分别为65.56%±12.26%和46.74%±10.99%,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。在膀胱癌癌组织及癌旁正常组织中ATX条带灰度值为51.77%±10.32%和41.05%±8.02%,ATX蛋白表达量的差异有统计学意义(P<0.05)。3、ELISA检测外周血血清中ATX浓度结果显示,在正常人组、肾细胞癌组、膀胱癌组血清中ATX蛋白浓度分别为257.94±60.64ng/ml、276.65±54.32ng/ml、268.27±44.07ng/ml,虽然肾细胞癌组、膀胱癌组ATX浓度略高于正常人对照组,但该差异不具有显著统计学意义(p>0.05)。4、肾细胞癌组、膀胱癌组和正常人对照组外周血血清中LysoPLD活性分别为2.89±1.30nmol/(ml.min)、2.84±1.81nmol/(ml.min)、2.52±1.71nmol/(ml.min),与正常人对照组相比,膀胱癌组、肾细胞癌组中LysoPLD活性均有上升,但是差异不具有统计学意义(p>0.05)。结论:1、相对于肾细胞癌、膀胱癌癌旁正常组织,ATX蛋白水平在肾细胞癌、膀胱癌癌组织中高表达,提示ATX蛋白与肾细胞癌、膀胱癌的发生、发展有密切关系。2、ATX与肾细胞癌的临床分期、病理分级呈正相关,但是与年龄、性别、肿瘤大小等临床特征无相关性。ATX蛋白表达水平与肾细胞癌的恶性程度有关。3、肾细胞癌、膀胱癌患者相对于正常人的外周血血清中LysoLPD活性和ATX蛋白浓度虽有上升趋势,但是差异不显著。提示ATX与肾细胞癌、膀胱癌的早期诊断有关。