BMSCs复合TGF-β2/geneX经髓芯减压移植治疗激素性兔股骨头坏死的实验研究

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[目的]探讨骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)复合转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2, TGF-β2)及geneX支架经髓芯减压移植治疗激素性股骨头坏死的可行性。[方法]BMSCs细胞的培养:取正常大白兔股骨骨髓进行BMSCs的原代培养、传代培养,用rLV-ZsGreen荧光慢病毒转染标记培养好的细胞。采用健康成年新西兰大白兔作为实验动物,氢化可的松激素以40 mg/kg体重,连续臀肌注射3天,每天1次,饲养1个月后成模,致使大白兔股骨头坏死。将造模成功的实验动物随机分为3组:单纯髓芯减压,髓芯减压十支架材料,髓芯减压+支架+BMSC+TGF-p2组,每组5只动物,并经行双侧股骨头的治疗,样本共计30侧股骨头;另取5只未造模正常大白兔作为正常空白组,不做任何处理及治疗。进行髓芯减压联合BMSCs复合TGF-β2/geneX治疗2个月后,取各组动物的股骨头,观察带GFP标记的BMSCs在动物模型中的分布、存活情况。免疫组织化学染色对Cbfal、BMP2进行蛋白定位的观察,Q-PCR检测Cbfal、BMP2基因的定量表达,Western Blot检测Cbfal、BMP2蛋白的定量表达。[结果]采用氢化可的松激素成功制作了新西兰白兔激素性股骨头坏死的动物模型。采用培养并鉴定好的BMSCs复合TGFβ2/geneX支架移植治疗股骨头坏死动物模型,通过冰冻切片并在荧光显微镜下发现经慢病毒rLV-ZsGreen标记的BMSCs可存活并分布于实验动物的股骨头中,细胞呈现绿色荧光。免疫组化结果显示实验组Cbfal、BMP2细胞阳性达量较空白组及对照组上调(P<0.05),Q-PCR结果显示实验组Cbfal、BMP2基因表达量较空白组及对照组上调(P<0.05). Western Blot结果显示实验组Cbfal、BMP2蛋白表达量较空白组及对照组上升(P<0.05)。[结论]BMSCs复合TGF-β2/geneX经髓芯减压移植治疗兔股骨头坏死的实验效果优于单纯治疗,其机制可能是通过上调Cbfal、BMP2的表达来实验,为激素性股骨头缺血坏死的临床综合治疗寻求新的方法提供实验依据。
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