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IFIT家族也称ISG56家族,是一类干扰素诱导基因,在进化上高度保守,包括IFIT1(也称ISG56)、IFIT2(也称ISG54)、IFIT3(也称ISG60)和IFIT5(也称ISG58)4个成员。该家族成员成簇定位在同一染色体上,各个基因都包含2个外显子和1个内含子。在干扰素、病毒、脂多糖等条件的刺激下,该家族基因高效表达。其表达的蛋白主要作用于翻译的起始、病毒的复制、I型干扰素的反馈调节、细胞的迁移和增殖等。本研究克隆了猪IFIT2和IFIT5基因的完整编码区,并对IFIT2和IFIT5的外显子2进行了多态位点鉴定和群体遗传学分析,采用Real-timePCR技术构建了猪IFIT2和IFIT5的组织表达谱,通过构建报告基因缺失载体和生物信息学方法对猪IFIT2的启动子进行活性分析,同时进行了猪IFIT2/5抗病分子机制的初步研究。得到的主要结果如下:1.猪IFIT2基因编码区(Codingsequence,CDS)区全长为1407bp,包含2个外显子,其中CDS区的前5个核苷酸位于外显子1上,其余在外显子2上,共编码468个氨基酸。猪IFIT2基因cDNA序列已提交到GenBank上(GenBankaccessionNo.JX070559)。2.猪IFIT5基因CDS区全长为1449bp,包含2个外显子,其中CDS区的前5个核苷酸位于外显子1上,其余在外显子2上,共编码482个氨基酸。猪IFIT5基因cDNA序列已提交到GenBank上(GenBankaccessionNo.JX280459)。3.猪IFIT2基因外显子2上检测到5个单核苷酸多态位点(Singlenucleotidepolymorphism,SNPs),分别是c.259G>A、c.520T>G、c.571C>T、c.879A>G和c.889A>G。其中4个是错义突变,引起多肽链上p.Gly87Ser、p.Phe174Val、p.Pro191Ser和p.Ala297Thr替代。运用生物信息学分析发现c.259G>A(p.Gly87Ser)和c.520T>G(p.Phe174Val)可能会影响蛋白的结构功能。4.猪IFIT5基因外显子2上检测到1个SNP(c.462A>G),为非错义突变。5.猪IFIT2和IFIT5在心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠、小肠、膀胱、腿肌和淋巴组织中均表达,但表达量存在着差异。其中,IFIT2在脾、肝和心脏中的表达量高于其他组织;IFIT5在肝、心和小肠中表达量较高。6.猪IFIT2启动子的最小活性区位于-162~-126bp;-1838~-1759bp和-389~-310bp存在着负调控元件;-1661~-1579bp、-310~-225bp和-225~-162bp存在着正调控元件。生物信息学分析发现ISRE结合因子、NF-kappaB、DeltaEF1、c-Rel和Id3可能是调控IFIT2基因表达的重要转录因子。7.猪IFIT2和IFIT5的过表达对ISRE调控的下游荧光素酶报告基因的表达作用不明显,IFIT5在24h对NF-kappaB调控的下游荧光素酶报告基因的表达有负调控作用。