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目的:在本课题组的前期研究中,发现晚期糖基化终末产物受体（The receptor for advanced-glycation end products,RAGE）在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变、宫颈鳞癌中的表达逐渐增高。但RAGE的表达对宫颈鳞癌细胞生物学行为的影响尚未明确。本研究通过调节宫颈鳞癌细胞中RAGE的表达,观察其对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移等生物学行为及裸鼠成瘤能力的影响及相关机制,以探讨RAGE在宫颈鳞癌发生发展中的作用。方法:第一部分:分别采用p Lenti-C-m GFP-RAGE质粒转染方法和RNA干扰技术构建稳定过表达和低表达RAGE基因的宫颈鳞癌Si Ha细胞和Ca Ski细胞,然后采用Western blot方法检测细胞中RAGE蛋白表达情况;分别采用CCK-8方法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。第二部分:采用Western blot方法检测RAGE表达改变后Si Ha细胞中增殖相关蛋白PCNA、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及侵袭和迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9、Fascin、Ezrin蛋白的表达。第三部分:构建裸鼠宫颈癌皮下移植瘤模型,分别将转染RAGE慢病毒的宫颈鳞癌细胞、转染空载体的宫颈鳞癌细胞接种裸鼠,比较两组肿瘤体积的变化和瘤体重量。并采用Western blot方法检测增殖相关蛋白PCNA、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及侵袭和迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9、Fascin、Ezrin蛋白的表达情况。结果:首先,转染RAGE慢病毒后Si Ha细胞中RAGE蛋白的表达为1.96±0.34,明显高于未转染组（1.18±0.15）和空载体组（1.16±0.18）,差异有统计学意义（P<0.05）;同样,转染RAGE慢病毒后Ca Ski细胞内RAGE蛋白表达量明显高于未转染组和空载体组。提示稳定高表达RAGE的Si Ha和Ca Ski细胞构建成功。而RAGE RNA干扰后Si Ha细胞中RAGE的表达明显下降,干扰组1和干扰组2中RAGE的表达量分别为0.17±0.08、0.23±0.11,均明显低于阴性对照组的1.04±0.11,差异有统计学意义（P<0.05）;同样,Ca Ski细胞RAGE RNA干扰组1和干扰组2中RAGE的表达也均明显低于阴性对照组。第一部分1.与未转染组0.99±0.03和空载体组0.98±0.08比较,转染RAGE慢病毒组Si Ha细胞450nm处的吸光度值明显增高（1.14±0.21）,P<0.05;与阴性对照组（1.02±0.21）相比,RAGE RNA干扰实验组450nm处的吸光度值（干扰组1:0.82±0.23;干扰组2:0.87±0.19）明显减小,P<0.05。在Ca Ski细胞中同样发现RAGE高表达促进细胞增殖,而低表达抑制细胞增殖。2.Si Ha细胞未转染组、空载体组与RAGE过表达组的凋亡率分别为18.33±2.06%、19.81±2.49%和7.10±2.67%,RAGE过表达组的凋亡率明显低于未转染组和空载体组,P<0.05。RNA干扰组1和干扰组2中,Si Ha细胞的凋亡率分别为12.84±0.44%、10.32±0.35%,均明显高于阴性对照组4.34±0.18%,P<0.05。在Ca Ski细胞中同样发现RAGE高表达抑制细胞凋亡,而低表达促进细胞凋亡。3.在Transwell细胞侵袭实验中,与未转染组（356.81±21.30）和空载体组（349.60±42.79）相比,RAGE过表达组Si Ha细胞的穿透数目（603.61±181.73）显著增加,P<0.05。RAGE RNA干扰后Si Ha细胞的细胞穿透数目（干扰组1:216.58±32.16;干扰组2:267.23±52.48）与阴性对照组（446.41±45.23）相比均明显减少,P<0.05。在Ca Ski细胞中同样发现RAGE表达上调后,细胞侵袭能力增加,而RAGE表达下调会抑制细胞侵袭。4.在Transwell细胞迁移实验中,Si Ha细胞RAGE过表达组细胞穿透数目为669.33±41.27,与未转染组的423.0±37.45和空载体组的433.02±57.23相比,均明显增多,P<0.05。RAGE RNA干扰后Si Ha细胞的细胞穿透数目（干扰组1:211.12±16.43;干扰组2:217.52±14.51）与阴性对照组（320.13±12.82）相比均明显减少,P<0.05。在Ca Ski细胞中同样发现RAGE表达上调后,细胞迁移能力增加,而RAGE表达下调会抑制细胞迁移。第二部分1.与未转染组和空载体组相比,RAGE过表达组Si Ha细胞中增殖相关蛋白PCNA、凋亡相关蛋白Bcl-2、及侵袭和迁移相关蛋白Ezrin表达均明显增加（P<0.05）。2.与阴性对照组相比,RAGE RNA干扰后细胞中PCNA、Bcl-2、Ezrin表达均明显减少（P<0.05）。3.而三组细胞中,细胞中凋亡相关蛋白Bax、侵袭和迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9、Fascin表达变化无统计学意义（P>0.05）。第三部分1.RAGE过表达组裸鼠的肿瘤体积和瘤体重量分别为1599.47±247.97mm3和1.67±0.35g,均明显大于空载体组的629.92±140.59mm3和0.74±0.42g（P<0.05）。2.与空载体组相比,RAGE过表达组肿瘤组织中PCNA、Fascin蛋白的表达量明显升高,P<0.05,Bax蛋白的表达量明显减少,P<0.05。而MMP-2、MMP-9、Ezrin蛋白表达量在两组之间没有差别。结论:1.RAGE可以促进宫颈鳞癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,抑制细胞的凋亡。2.RAGE对宫颈癌细胞生物学行为的影响与增殖相关蛋白PCNA、凋亡相关蛋白Bcl-2和侵袭迁移相关蛋白Ezrin相关。3.RAGE基因具有促进宫颈鳞癌细胞成瘤的能力。该作用和PCNA、Bax、Fascin蛋白相关,而与MMP-2、MMP-9、Ezrin蛋白无关。