目的 在乙型肝炎病毒(HBV)的诸多传播途径中，垂直传播是十分重要的一种途径，而在垂直传播中，目前尚无有效预防措施的是宫内传播，即HBV在孕期经过胎盘感染胎儿。造成这种情况的关键原因是宫内传播的机制还不清楚。国内外对这一问题的研究较少。我室在十余年的时间内从宏观和微观两个方面对HBV宫内传播机制作了深入的研究，提出血源性途径和细胞源性途径并存的假说，同时在细胞源性途径上作了深入细致的研究。按照这一假说HBV是逐层感染胎盘细胞最后侵入胎儿血循环，从而感染胎儿的，那么首先要感染的是胎盘组织学上的第一层细胞即滋养层细胞，以往的组织病理学研究已经得到了该层细胞感染的证据，但是在体的组织形态学研究无法阐明病毒动态感染的过程、感染机制和病毒在细胞内的复制表达情况。因此必须进行HBV感染离体培养滋养层细胞的实验，本项研究先对在体情况下HBV感染人胎盘滋养层细胞的情况作验证性研究，再以文献报道的实验方法为依据，用肝源性的HopG2细胞为靶细胞，摸索较为可行的HBV体外感染细胞实验方法。以此方法进行滋养层细胞的HBV感染实 第。＊巨大者还士学位分之验，探讨体外感染的可能性，为进一步研究感染机制打下基础。方法①本研究以陕西省妇幼保健院连续4I例血清乙型肝炎病毒表面抗原（HBSAg）阳性的产妇及其新生儿为研究对象，7例血清 HBSAg阴性的产妇及其新生儿为对照，收集产妇肘静脉血及新生儿的股静脉血，用ELISA法进行HBsAg、HBeAg复检。同时收集胎盘组织，以酶免疫组织化学法检测乙型肝炎病毒感染的孕妇胎盘组织中的HBSAg。②将乙型肝炎患者血清 （HBsAg、HBeAg、HBV DNA＊性）、2％PEG、1％DMSO加入完全培养基中组成培养系统与 HePGZ细胞共孵育 24 ’J。时，彻底洗涤后采用 ELISA法检测上清中的HBSAg、酶免疫组织化学（免疫细胞化学）法检测细胞中的HBSAg，PCR法检测细胞内 HBV DNA等方法检测感染情况，同时设立多组不同的对照。③用HBV体外感染HePGZ细胞同样的方法进行HBV体外感染人胎盘滋养层细胞的实验与检测。使用透射电镜法和胶体金标免疫电镜法对滋养层细胞感染情况进行验证。结果①41例血清 HBsAg阳性孕妇娩出的胎盘中有 30例能够检出 HBsAs，阳性信号呈棕黄色均匀细颗粒，出现在母面蜕膜细胞胞浆、滋养层细胞胞浆、胎盘间质Hofbauer细胞或血管内皮细胞胞浆。阳性信号出现频率及强度均以母面蜕膜细胞最高，滋养层细胞层次之，间质细胞层再次之，血管内皮细胞最低。②ELISA检测HepGZ细胞感染实验各组培养液上清中的HBSAg。加人含病毒血清、2％PEG、1％DMSO或含病毒血清、2％PEG的两个实验组上清从孵育后第24小时开始至细胞生长状态变差为止都保持阳性。免疫组化法检测细胞内HBSAg结果与ELISA结果相一致，即上述两实验组细胞铺片显示阳性，阳性信号呈棕黄色均匀细颗粒，出现于细胞胞质。细胞裂解后PCR法检测胞内 HBV DNA的实验结果也显示这两个实验组为阳性。③ELISA检测人胎盘滋养层细胞感染实验各组培养液上清HBSAg、免疫组化法检测细胞内 HBSAg、细胞裂解后 PCR法检测细胞内 HBV DNA的实验结果都 3 涕。军医大学硕士会让少上显示在HBV体外感染滋养层细胞实验中加入含病毒血清、2％PEG、1％DMSO的实验组和只加入合病毒血清、2％PEG均可呈现阳性。透射电镜法验证感染情况，可见细胞内病毒样颗粒。免疫电镜法也可以见胞内有HBSAg分布处的胶体金颗粒结合沉积。结论 综合以往文献报道和本研究的结果，可以看出HBV在体情况下确能够感染滋养层细胞。而在离体培养的情况下，滋养层细胞在乙型肝炎患者血清、2剁EG、1汕（或不加入DMSO）加入完全培养基中组成的培养系统中培养24小时也可能形成能够检测到的感染。但本项研究仅为一初步研究，由于人胎盘滋养层细胞为非肝源性细胞，所以对其与HBV的相互作用情况尚需进一步验证并加以深入研究。