金黄色葡萄球菌(Staphylococcus Aureus,S.aureus)是最常见的致病菌之一,会引起菌血症和各种感染如感染性心内膜炎、骨关节、皮肤和软组织等感染,目前被认为是人类最关注的“ESKAPE”超级细菌其中之一。其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)全球范围内的临床检出率在10%-50%,且通过多种机制对多种抗生素产生了耐药性,给临床治疗带来不小的挑战。作为革兰阳性菌,当前临床治疗MRSA的首选仍为β-内酰胺类药物。本实验室先前在20倍MIC苯唑西林作用下,对MRSAATCC43300进行蛋白组学测定,结果显示有21个在0.5h及1h均上调的蛋白,猜测这些蛋白可能会参与MRSA应对高浓度抗生素药物的机制,从中选取了四个蛋白对应的编码基因进行研究。而rsh基因是大肠杆菌(p)ppGpp合成酶relA在金黄色葡萄球菌中的同源基因,是严谨反应相关调控基因,在大肠埃希菌中被报道与细菌持留性相关。本研究通过金黄色葡萄球菌的同源重组双交换基因敲除方法,得到了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 ATCC43300 或 MRSA252 的 rsh、ebpS、/taS、metG、rlm/V 的基因敲除缺陷菌株,用来考察这些基因敲除后,对MRSA应对高浓度苯唑西林产生的影响。结果发现:ebpS和rsh基因敲除可以影响抗生素对MRSA的杀菌作用,而/taS、metG、rlm/N的敲除对MRSA的抗生素敏感性没有显著性影响。本研究比较了 ebpS基因和rsh基因敲除株与其亲株ATCC43300或MRSA252野野生型的体外生长曲线、对多类抗生素的最小抑菌浓度(MIC)和时间-杀菌曲线、生物膜形成及持留性等,考察相应基因敲除影响MRSA对苯唑西林的敏感性和持留性的程度。实验结果表明,ebpS、rsh基因敲除对菌株生长基本没有影响,但均能不同程度地增大菌株对苯唑西林的敏感性:rsh基因可能通过影响细胞壁、自溶作用及持留性影响MRSA对抗生素的敏感性,而ebpS则可能通过影响生物膜形成、以及影响高浓度抗生素氧化胁迫下胞内ROS水平,来影响MRSA对抗生素的敏感性。