论文部分内容阅读
背景与目的:膀胱癌是导致世界癌症相关性死亡的最常见泌尿系统肿瘤。手术,放疗和化疗是目前膀胱癌患者的主要治疗方法,但生存率仍然不高。其中一个主要原因是膀胱癌进展的分子机制仍然不明确。Hippo信号通路和p38 MAPK通路是两个非常重要的通路。Hippo信号通路的核心由多组分激酶级联组成,其诱导磷酸化并抑制下游转录激活剂YAP和TAZ。YAP,TAZ或其他Hippo通路组分的放松管制将导致疾病的发生,包括许多癌症。p38 MAPK通路是另一种控制细胞生长和死亡的高度保守的途径。越来越多实验证明了p38 MAPK通路在肿瘤发生、发展、转移和化疗反应中发挥了重要作用。在本研究中,我们构建了含有TAZ编码区序列的sh RNA载体,以研究TAZ在膀胱癌细胞中的功能。此外,我们还探讨了Hippo信号通路与p38 MAPK通路之间的功能的相互作用。方法与结果:首先,我们进行荧光定量PCR实验确认了TAZ shRNA的干扰效率。其次,我们使用膀胱癌细胞系T24和5637进行细胞增殖实验。CCK-8和EdU细胞增殖实验表明,敲低TAZ的表达抑制了肿瘤细胞增殖。为了检测细胞凋亡,我们通过western blot实验证明了敲低TAZ的表达后,caspase3和cleaved-caspase3的蛋白水平增高,结果表明敲低TAZ诱导细胞凋亡。此外,western blot实验也提示了TAZ可能调节p38蛋白的稳定性。最后,为了研究p38的活性是否会影响TAZ对细胞增殖和凋亡的调控作用,我们使用p38抑制剂PH-797804阻断了p38的活性。Western blot实验结果显示,当使用PH-797804处理后,抑制TAZ表达所导致的cleaved-caspase3的蛋白水平增加这一上调作用消失,cleaved-caspase3的蛋白水平与阴性对照组相比无明显增加。而CCK-8和EdU细胞增殖实验的结果显示,通过PH-797804处理后,敲低TAZ导致的细胞增殖率降低这一结果被逆转,肿瘤细胞的增殖数目增多,EdU阳性率升高。研究结果表明了p38的活性介导TAZ对细胞增殖和凋亡的调控作用。结论:TAZ在膀胱癌的发生发展中起着致癌基因的作用,有可能成为膀胱癌的诊断标志物和治疗靶标。TAZ shRNA可能为膀胱癌的体外基础研究开辟了一条新的途径。