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本研究选择以黄曲霉毒素(AF)为主、同时含有多种其他霉菌毒素的自然霉变玉米作为试验材料,考查了在日粮中不同自然霉变玉米用量对肉鸭生产性能、血液学与血液生化指标、抗氧化功能、免疫学功能的作用与影响,并就自然霉变玉米对肉鸭细胞增殖与细胞凋亡进行了研究,最后还探讨了日粮中补充营养性添加剂(VE和有机硒)对采食自然霉变玉米肉鸭的保护作用。研究共包括五个试验。试验一:不同用量自然霉变玉米对肉鸭生产性能、血液学及血液生化指标的影响试验采用单因子设计,用霉变玉米替代日粮中未霉变的正常玉米,替代比例分别为0%(对照组)、25%、50%、75%和100%,共五个处理组,每个处理8个重复,每个重复16只肉鸭,公母各半,试验期5周,其中1-14d饲喂小鸭日粮,15-35d饲喂生长鸭日粮。试验测定了试验日粮中霉菌毒素的含量、各处理组的重量、采食量;记录了各处理组的死亡只数与重量;在14d和35d分别采血进行血液学和血液生化指标测定。结果表明:(1)试验日粮所含霉菌毒素是以AF为主,其AFB1含量均随日粮中霉变玉米用量增加,而呈梯度递增,达到试验设计要求。(2)随着日粮中霉变玉米用量增加,肉鸭的ADFI呈极显著的线性下降(P<0.01)、ADG呈极显著的线性降低(P<0.01)、F/G呈显著的二次曲线降低(P<0.05)、死亡率呈极显著的增加(P<0.01)。(3)在1-2周龄时肉鸭MGR为2.05%/10ug AFB1/kg,5GRC为33.82ug AFB1/kg;在3-5周龄时,MGR为2.15%/10ug AFB1/kg,5GRC为57.22 ug AFB1/kg。(4)自然霉变玉米使肉鸭血液RBC减少,WBC增加,在小鸭阶段,鸭血液的HGB、HCT和MCH降低;血液中ALT、AST和LDH活性均显著或极显著增加。随肉鸭的日龄增加,血液中RBC、GHB、HCT、MCH、MCHC和RDW均呈极显著升高(P<0.01),而PLT、MCV极显著下降(P<0.01)。结论:自然霉变玉米抑制肉鸭采食,使肉鸭生长减慢、F/G降低,饲料利用率提高,死亡率增加。在本试验条件下,霉变玉米替代正常玉米比例不超过25%,不会显著影响肉鸭生产性能。试验二:自然霉变玉米对肉鸭生产性能、抗氧化功能及免疫功能的影响采用单因子试验设计,用霉变玉米替代日粮中未霉变的正常玉米,替代比例分别为0%、50%和100%,共三个处理组,每个处理8个重复,每个重复16只肉鸭,公母各半,试验期5周,其中1-14d饲喂小鸭日粮,15-35d饲喂生长鸭日粮。试验测定各处理组的增重、采食量,记录了死亡鸭的只数和重量,并在14d和35d采血、剖杀试验鸭,测定血液和肝脏抗氧化指标、血液生化指标、免疫器官指数和特异性抗体滴度。结果表明:(1)在整个试验期内,随着日粮中霉变玉米用量增加,各处理组鸭的ADG、ADFI、F/G均呈极显著的线性降低(P<0.01),死亡率呈极显著线性增加(P<0.01)。与试验—研究结果相似。(2)在整个试验期内,100%霉变玉米组鸭血清中SOD活性均极显著低于对照组(P<0.01);随日粮中霉变玉米用量增加,血清中GSH-PX和CAT活性而呈下降趋势,MDA和蛋白质羰基含量呈增加的趋势。(3)在14d时,0%霉变玉米组鸭肝脏中CAT活性显著高于50%霉变玉米组和100%霉变玉米组(P<0.05),肝脏中SOD、GHS-PX活性呈下降趋势;MDA和蛋白质羰基呈增加趋势。在35d时,各处理组鸭肝脏中的SOD、GSH-PX、CAT、MDA和蛋白质羰基差异不显著(P≥0.05)。结论:霉变玉米使肉鸭产生氧化应激,导致肝脏损伤,肝脏功能改变,从而影响肉鸭生产性能。试验三:维生素E和酵母硒对采食自然霉变玉米肉鸭生产性能和免疫功能的影响采用2x2析因试验设计,其中玉米2种:未霉变正常玉米、自然霉变玉米;在基础日粮(含而有VE 10IU/kg、无机Se 0.2mg/kg)中额外添加维生素E(VE)+酵母硒(YSe),添加量为0和VE 50IU/kg+YSe0.2mg/kg两个水平,共四个处理组。每个处理7个重复,每个重复16只肉鸭,公母各半,试验期4周,其中1-14d饲喂小鸭日粮,15-28d饲喂生长鸭日粮。试验测定了试验日粮中霉菌毒素含量、各处理组的重量、采食量;记录了各处理组的死亡只数与重量;并在14d和28d采血、剖杀试验鸭,测定免疫器官指数、体液免疫、细胞免疫、细胞因子含量。结果表明:(1)在整个试验期内,霉变玉米极显著降低鸭ADG和ADFI(P<0.01),补充VE+YSe显著提高鸭的ADG和ADFI (P<0.05)。(2)霉变玉米不同程度的增加了鸭的肝脏指数、脾脏指数和法氏囊指数,并极显著的降低了鸭的胸腺指数,补充VE+YSe能显著提高霉变玉米组鸭脾脏指数和法氏囊指数。(3)霉变玉米和补充VE+YSe对血液中IgG、IgA、IgM含量均无显著影响(P≥0.05),但是霉变玉米使特异抗体滴度显著下降,而补充VE+YSe可提高抗体滴度。(4)霉变玉米使外周血T淋巴细胞转化率、ANAE阳性率显著或极显著降低,补充VE+YSe使T淋巴细胞转化率、ANAE阳性率升高。结论:采食霉变玉米的肉鸭补充VE+YSe能缓解对采食和生长的抑制作用,死亡率降低,但对F/G没有作用;霉变玉米抑制肉鸭细胞免疫和体液免疫,但对细胞免疫影响比体液免疫更大;补充VE+YSe能部分缓解对免疫的抑制作用。试验四:自然霉变玉米与维生素E、酵母硒对肉鸭Toll样受体和β-防御素基因表达的影响采用2x2析因试验设计,其中玉米2种:未霉变正常玉米、自然霉变玉米;在基础日粮中额外添加VE+YSe,添加量为0和VE 50IU/kg+YSe0.2mg/kg两个水平,共四个处理组(基础日粮中含而有VE 10IU/kg、无机Se0.2mg/kg)。每个处理7个重复,每个重复16只肉鸭,公母各半,试验期4周,其中1-14d饲喂小鸭日粮,15-28d饲喂生长鸭日粮。采用实时荧光定量PCR测定了14d肉鸭肝脏和脾脏细胞TLR-1mRNA、TLR-4 mRNA和β-防御素mRNA的表达。结果表明:(1)霉变玉米使14d肉鸭肝脏细胞TLR-1mRNA极显著上调(P<0.01),补充VE+YSe有上调肝脏细胞TLR-1mRNA的趋势,但差异不显著(P≥0.05);霉变玉米也使肝脏细胞TLR-4mRNA上调,饲喂霉变玉米的鸭补充VE+YSe显著或极显著上调TLR-4mRNA表达;霉变玉米使β-防御素mRNA表达极显著上调,饲喂霉变玉米的鸭补充VE+YSe极显著上调肝脏细胞β-防御素mRNA表达。(2)霉变玉米使14d肉鸭脾脏细胞中TLR-1 mRNA表达上调、TLR-4 mRNA下调,但是差异不显著,补充VE+YSe有下调脾脏细胞TLR-1 mRNA和TLR-4 mRNA的趋势;霉变玉米和补充VE+YSe均使脾脏细胞β-防御素mRNA显著或极显著上调。(3)脾脏细胞TLR-1mRNA、β-防御素mRNA均极显著高于肝脏细胞的表达量,而肝脏细胞TLR-4mRNA又极显著高于脾脏细胞。结论:鸭采食霉变玉米配制的日粮后,能通过影响固有免疫的模式识别受体TLR-1、TLR-4和β-防御素基因的表达,激活鸭的固有免疫系统;日粮中补充维生素E和酵母硒对固有免疫系统有调节作用。试验五:自然霉变玉米与维生素E、酵母硒对肉鸭肝脏和脾脏细胞凋亡及细胞增殖的影响采用2x2析因试验设计,其中玉米2种:未霉变正常玉米、自然霉变玉米;在基础日粮中额外添加VE+YSe,添加量为0和VE 50IU/kg+YSe0.2mg/kg两个水平,共四个处理组(基础日粮中含而有VE 10IU/kg、无机Se 0.2mg/kg)。每个处理7个重复,每个重复16只肉鸭,公母各半,试验期4周,其中1-14d饲喂小鸭日粮,15-28d饲喂生长鸭日粮。采用流式细胞仪测定了14d和28d肉鸭肝脏和脾脏细胞凋亡率和细胞周期。结果表明:(1)霉变玉米使肝脏和脾脏细胞凋亡率显著或极显著增加,而日粮补充VE+YSe使肝脏和脾脏细胞凋亡率降低,霉变玉米和VE+YSe之间互作效应不显著。(2)霉变玉米无论是对14d还是28d肉鸭肝脏和脾脏细胞增殖均有显著或极显著的影响,使G0/G1期细胞百分率减少,S期和G2+M期细胞百分率增加,细胞分裂指数(PI)增加。(3)日粮中补充VE+YSe有使肝脏和脾脏G0/G1期细胞百分率减少、S期和G2+M期细胞百分率增加的趋势,PI增加。结论:鸭采食霉变玉米配制的日粮后,既促使肝脏和脾脏细胞凋亡,又刺激细胞增殖;补充维生素E和酵母硒可减少细胞凋亡,促进细胞增殖。本研究结果表明,采食自然霉变玉米配制的日粮后,鸭采食量受到明显抑制,生长速度减慢,死亡率增加,但是料肉比降低,饲料转化率提高。鸭的肝脏受到损伤,出现明显病理变化,肝脏功能发生改变,血液中多种与肝功相关的酶活性发生显著升高或降低。霉变玉米导致鸭出现氧化应激反应,与抗氧化有关的酶活性降低,氧化产物(MDA、蛋白质羰基)增加。霉变玉米对肉产生明显的免疫毒性作用,使得鸭特异性抗体滴度降低,外周血T淋巴细胞转化率、ANAE阳性率降低,固有免疫系的TLR-1、TLR-4和p-防御素基因表达发生改变,表现为鸭体液免疫和细胞免疫受到抑制,而固有免疫被激活。霉变玉米还使鸭肝脏和脾脏细胞凋亡率增加,同时,又刺激了细胞增殖。在日粮中补充维生素E和酵母硒能部分消除霉变玉米对鸭所引起的免疫毒性作用。