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金银花为一常用中药,为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.、红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、山银花Lonicera confusa DC.或毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehd.的干燥花蕾或带初开的花。夏初花开放前采收,干燥;或用硫磺熏后干燥。金银花具有清热解毒、凉散风热的功能,主治痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热,广泛用于中药方剂及中成药。 金银花药材的主要有效成分为绿原酸(chlorogenic acid)、咖啡酸(caffeic acid)及异绿原酸(isochlorogenic acid)等有机酸及挥发油。挥发油主要含芳樟醇(linalool)、双花醇、香叶醇、β—苯乙醇、苯甲醇、异双花醇、α—松油醇、丁香油酚、棕榈酸乙酯、棕榈酸、二十四酸甲酯等。绿原酸类化合物具有抗菌、利胆、止血、镇咳、去痰、增加白血球等药理作用,芳樟醇具有抗病毒的作用。 2000年8月药品监督管理局颁布的《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》中指出为加强中药注射剂质量管理,需建立中药注射剂原药材、中间体及其制剂的指纹图谱标准。以金银花挥发油为有效成分的注射液已作为医院制剂注册,对于发热、上呼吸道感染、肺炎、腮腺炎、外科化脓性疾患均有较好疗效,但目前还没有文献报道关于金银花注射液的指纹图谱研究,我们对以金银花挥发油为有效成分的金银花注射液进行了较为全面的指纹图谱研究。 我们共收集了山东、河南、湖南、浙江四个产地的药材,其中山东金银花有晒干、阴干和硫磺熏等炮制方法。选用道地山东金银花(济银花)为主要研究对象,对药材绿原酸等化合物进行了指纹图谱研究。金银花药材用50%甲醇冷浸1h,浸出物用高效液相色谱法检测(ZORBAX SB-C18柱,乙腈—0.1%磷酸梯度洗脱),建立的方法稳定、可靠、重现性好。已初步建立了金银花药材50%甲醇提取物的高效液相色谱指纹图谱HPLC—FPS,结果显示同一产地、同一炮制方法显示了相当稳定、相似度很高的指纹图谱;不同产地、不同炮制方法均显示 浙江大学硕士学位论文·摘要和前言FPS中绿原酸为一单一成分,故也可通过外标法测定绿原酸的含量。建立的HPLC一FPS可作为金银花绿原酸等化合物的全面质量控制方法,也可用于鉴别,比中国药典2000版对金银花药材仅规定绿原酸含量测定更科学、更全面。 对药材挥发油部分进行了GC指纹图谱的研究。标准挥发油提取器提取所得的挥发油用氯仿稀释约40倍,采用DB一1701柱(30m X 0.32InlnXO.25腼)及程序升温条件进行分析。结果显示同一产地、同一炮制方法显示了相当稳定、相似度很高的指纹图谱;不同产地、不同炮制方法均显示了各自的指纹特征,可用于鉴别不同产地及不同炮制方法,为合理应用金银花提供科学依据。并且通过GC一MS对指纹图谱中的各共有峰分别进行成分确认。 另外对金银花注射液进行了制剂工艺研究,确定了金银花注射液GC指纹图谱的方法,进行方法学考察时发现重现性未能达到指纹图谱的要求,可能需要对金银花注射液的制剂工艺进行进一步的改进。我们分别按金银花挥发油GC一FPS条件及注射液GC一FPS条件考察了注射液与挥发油间的相关性,结果显示注射液成分主要为挥发油的低沸点成分,经GC一MS检测到具有抗病毒作用的芳樟醇。关键词:HPLC一FPS;