【摘 要】
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目的:探讨RACK1对宫颈癌细胞脂肪酸合成关键酶的表达调控,及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:（1）应用q RT-PCR和免疫组织化学方法检测宫颈鳞癌（CSCC）、高级别鳞状上皮内病变（HSIL）及正常宫颈（NC）组织中rack1 m RNA和RACK1蛋白表达水平（2）病毒转染技术沉默宫颈癌细胞C33a、SiHa中RACK1表达;根据不同处理分为3组:sh RACK1-1（RACK1沉默组1）
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目的:探讨RACK1对宫颈癌细胞脂肪酸合成关键酶的表达调控,及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:（1）应用q RT-PCR和免疫组织化学方法检测宫颈鳞癌（CSCC）、高级别鳞状上皮内病变（HSIL）及正常宫颈（NC）组织中rack1 m RNA和RACK1蛋白表达水平（2）病毒转染技术沉默宫颈癌细胞C33a、SiHa中RACK1表达;根据不同处理分为3组:sh RACK1-1（RACK1沉默组1）,sh RACK1-2（RACK1沉默组2）和sh-NON（RACK1沉默空载组）,q RT-PCR结合Western blotting方法验证基因沉默效率。（3）MTT、平板克隆试验、流式细胞术检测沉默RACK1后细胞增殖能力和凋亡水平;Western Blot和q RT-PCR方法检测Cylin D1、caspase-3、caspase-9、Bax和Bcl-2的表达情况;应用q RT-PCR检测25例CSCC组织中上述指标m RNA的表达,结合Spearman秩相关分析其相关性。（4）BODIPY染色检测经过转染sh RACK1后细胞内脂质含量;Western Blot方法检测ACC1、FASN的表达。（5）sh RACK1-1组添加油酸处理后,观察细胞增殖和凋亡水平的变化。（6）采用Western Blot检测转染sh RACK1后,AKT/m TOR/SREBP1信号通路相关蛋白表达;染色质免疫共沉淀技术（Ch IP）验证SREBP1是否与ACC1、FASN的启动子结合。（7）免疫共沉淀（Co-IP）结合免疫荧光技术检测胞内RACK1与AKT是否结合及两者共定位情况。结果:（1）宫颈癌组织和宫颈癌细胞C33a、SiHa的rack1 m RNA、RACK1蛋白的表达水平高于正常宫颈组织和正常宫颈上皮细胞H8（P=0.000）;RACK1过表达与宫颈癌病理分级（χ~2=5.239,P=0.002）、临床分期（χ~2=9.552,P=0.009）、淋巴结转移（χ~2=4.688,P=0.030）相关（2）相比于sh-NON组,sh RACK1-1组和sh RACK1-2组的细胞增殖能力降低,凋亡水平显著增高（P＜0.001或P＜0.01）;Cyclin D1和Bcl-2的表达减少,caspase-9、caspase-3、Bax表达增强（P＜0.001）;25例CSCC组织中rack1 m RNA与cyclind1（r=0.665,P＜0.001）、bcl-2（r=0.572,P＜0.01）m RNA表达显著正相关,与caspase-9、caspase-3、bax m RNA呈负相关。（3）细胞内脂质含量、游离脂肪酸水平明显降低（P＜0.001）;ACC1、FASN的表达显著下调（P＜0.001）;宫颈癌组织中rack1 m RNA表达与acc1（r=0.816,P＜0.001）、fasn（r=0.722,P＜0.001）m RNA表达呈正相关。（4）相对于sh-NON组,sh RACK1-1组和sh RACK1-2组细胞内的柠檬酸含量下降约1.56倍（C33a）、1.47倍（SiHa）;油酸处理后,与sh RACK1-1组相比sh-RACK1-1+OA组细胞增殖能力显著上升,凋亡水平显著下降（P＜0.001）。（5）沉默RACK1后显著降低p-AKT（Ser473）、p-m TOR（Ser2448）及SREBP1的表达（P＜0.001）;Ch IP结果显示,SREBP1均与ACC1、FASN的启动子结合。（6）Co-IP、免疫荧光结果提示,两种癌细胞系中RACK1均与AKT结合并在胞质内有共定位表达。结论:（1）RACK1在宫颈癌组织及宫颈癌细胞系中呈现过表达趋势。（2）沉默RACK1后抑制宫颈癌细胞增殖能力,促进其凋亡的发生。（3）RACK1通过激活AKT/m TOR/SREBP1信号通路增强脂肪酸合成,促进脂质积累;但沉默RACK1未影响宫颈癌C33a、SiHa细胞对外源性脂肪酸的摄取。
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