成纤维细胞复合羊脱细胞真皮基质修复裸小鼠创面的实验研究

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nongfeng4
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目的 研究成纤维细胞(FBs)复合羊脱细胞真皮基质(sADM)对裸小鼠创面修复的影响。方法 (1)从手术废弃的包皮组织中分离培养FBs,通过免疫荧光方法进行鉴定;通RT-PCR检测其VEGF、bFGF的表达;(2)制备sADM,通过MTS法检测其对细胞增殖生长有无毒性;(3)制备复合FBs的sADM,HE染色鉴定FBs与sADM复合效果;(4)选取7周龄裸小鼠45只,适应性饲养1周,制备全层皮肤损伤模型,随机分为A组复合有FBs的sADM实验组,B组sADM对照组,C组纱布对照组。分别于术后7d、14d、21d计算创面愈合率、观察血管;qRT-PCR检测VEGF、Bax、bcl-2基因的表达量。将所得数据实验数据用`x±s表示,使用SPSS17.0进行统计分析。结果 免疫荧光鉴定细胞表面标志蛋白波形蛋白呈阳性表达,RT-PCR检测细胞VEGF、bFGF呈阳性表达。MTS法检测其对细胞增殖生长有无毒性结果示:除第3、5天对照组和实验组的OD值P<0.05差异具有统计学意义外,其余时间实验组与对照组的OD值差异均不具有统计学意义。Image J统计计算创面愈合率:sADM复合FBs组、sADM组第7天创面愈合率分别为(45.55±7.16)%、(26.76±1.56)%,P<0.01,差异有统计学意义,第14天创面愈合率分别(88.71±2.03)%、(79.00±1.48)%,P<0.05,差异有统计学意义,第21天创面愈合率分别为(99.67±0.08)%、(97.25±1.44)%,P<0.05,差异有统计学意义,sADM复合FBs组创面愈合率均高于sADM组;sADM复合FBs组、纱布组:第7天创面愈合率分别为(45.55±7.16)%、(18.31±4.61)%,P<0.001,差异有统计学意义,第14天创面愈合率分别为(88.71±2.03)%、(72.74±6.35)%,P<0.01,差异有统计学意义,第21天创面愈合率分别为(99.67±0.08)%、(95.11±1.52)%,P<0.05,差异有统计学意义,sADM复合FBs组创面愈合率均高于纱布组。qRT-PCR检测结果表明:第7天、14天、21天时,sADM复合Fbs组、ADM组、纱布组:Bax表达量均呈下调趋势,sADM复合FBs组、sADM组:第7天基因相对表达量分别为(0.382±0.021)、(0.394±0.040),P>0.05,差异无统计学意义,第14天基因相对表达量分别为(0.226±0.014)、(0.272±0.014),P<0.01,差异有统计学意义,第21天基因相对表达量分别为(0.023±0.013)、(0.030±0.005),P>0.05,差异无统计学意义;sADM复合FBs组、纱布组:第7天基因相对表达量分别为(0.382±0.021)、(0.495±0.036),P<0.01,差异有统计学意义,第14天基因相对表达量分别为(0.226±0.014)、(0.363±0.016),P<0.001,差异有统计学意义,第21天基因相对表达量分别为(0.023±0.013)、(0.054±0.003),P<0.01,差异有统计学意义。bcl-2表达呈上调趋势,sADM复合FBs组、sADM组:第7天基因相对表达量分别为(0.067±0.013)、(0.048±0.017),P>0.05,差异无统计学意义,第14天基因相对表达量分别为(0.169±0.007)、(0.140±0.004),P<0.01,差异有统计学意义,第21天基因相对表达量分别为(0.406±0.018)、(0.322±0.015),P<0.001,差异有统计学意义;sADM复合FBs组、纱布组:第7天基因相对表达量分别为(0.067±0.013)、(0.055±0.030),P>0.05,差异无统计学意义,第14天基因相对表达量分别为(0.169±0.007)、(0.123±0.005),P<0.001,差异有统计学意义,第21天基因相对表达量分别为(0.406±0.018)、(0.233±0.011),P<0.001,差异有统计学意义。VEGF表达量呈下调趋势,sADM复合FBs组、sADM组:第7天基因相对表达量分别为(1.191±0.051)、(1.092±0.027),P<0.05,差异有统计学意义,第14天基因相对表达量分别为(0.632±0.023)、(0.553±0.046),P>0.05,差异无统计学意义,第21天基因相对表达量分别为(0.135±0.045)、(0.319±0.017),P<0.01,差异有统计学意义;sADM复合FBs组、纱布组:第7天基因相对表达量分别为(1.191±0.051)、(1.032±0.025),P<0.01,差异有统计学意义,第14天基因相对表达量分别为(0.632±0.023)、(0.491±0.064),P<0.05,差异有统计学意义,第21天基因相对表达量分别为(0.135±0.045)、(0.292±0.038),P<0.01,差异有统计学意义。结论 (1)从包皮环切手术废弃的包皮组织中经过检测鉴定分离培养出大量纯度高、增殖能力强的原代FBs,且成功制备出复合有FBs的sADM功能性敷料;(2)制备的复合有FBs的sADM功能性生物敷料促进创面愈合。
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