第一部分：Angiopoietin-1/-2蛋白和mRNA在小鼠着床期子宫内膜中的表达 目的：研究Ang-1/-2蛋白在小鼠胚胎着床期的子宫内膜的分布及其mRNA转录水平的表达，以探讨Ang-1/-2基因在胚胎着床过程中的作用和生物学意义。 方法：将妊娠第2，4，6和8天的昆明种小鼠脱颈法处死，取其子宫内(蜕)膜，进行常规的组织固定、包埋和切片。分别运用免疫组织化学S-P法和原位杂交技术，检查着床期子宫内膜中Ang-1/-2蛋白的表达及其mRNA的转录水平。并采用LeizASM型计算机图像分析技术检测不同时期子宫内膜中Ang-1/-2表达的平均光密度值。采用SPSS11.0统计软件包，利用t检验法检验各组间是否存在差异。 结果：1.Ang-1蛋白及mRNA的表达结果：1)免疫组化结果显示，Ang-1特异性免疫反应产物在基质细胞中表达，随着妊娠天数的增加，表达逐渐增强(P＜0.01)，且上皮细胞和血管壁办为Ang-1特异性免疫反应阳性结构。2)原位杂交结果显示，Ang-1mRNA自妊娠第2天起即表达于基质细胞中，第4天血管壁胞浆中也出现阳性表达，且两者的表达强度在妊娠第6、第8天时逐渐增加。平均光密度值具有显著性差异(P＜0.01)。2.Ang-2蛋白和mRNA的表达结果：1)免疫组化结果显示，Ang-2特异性免疫反应产物在基质细胞及腔上皮细胞胞浆中表达，随着妊娠天数的增加，表达逐渐增强(P＜0.01)。2)原位杂交结果显示，Ang-2mRNA自妊娠第2天起即表达于基质细胞和腺上皮；第4天血管壁胞浆中也出现阳性表达，且其表达强度在妊娠第6，第8天时逐渐增加。平均光密度(OD)值具有显著性差异(P＜0.01)。 结论：Ang-1/-2基因在小鼠妊娠过程中的表达情况提示，Ang-1/-2在着床前小鼠子宫内膜的上皮细胞和基质细胞中即开始表达，并随妊娠进程而逐渐在内膜细胞、血管壁内皮细胞中也出现表达，且表达逐渐增强，提示Ang-1/-2对胚胎着床有着重要的作用。同时实验结果表明Ang-1/-2的mRNA和蛋白的表达部位有一定的差别，说明Ang-1/-2基因在胚胎着床过程中可能通过自分泌和旁分泌的形式对血管新生、血管生成和血管重塑起着重要的调控作用，从而有利于滋养层细胞在胎母界面移行、扩展并侵入母体子宫内膜的基质，为囊胚成功着床起了重要的作用。 第二部分:Angiopoietin-1/-2基因在人围着床期子宫内膜的表达 目的：通过检测Ang-1/-2蛋白和mRNA在人围着床期子宫内膜中的分布及表达情况，以研究Ang-1/-2基因的表达在人着床过程中所起的作用。 方法：分别取排卵期、分泌中期及妊娠40、50天的人子宫内膜(蜕膜)，运用免疫组织化学S-P法和原位杂交技术检查着床期子宫内膜中Ang-1/-2蛋白的表达及Ang-1/-2mRNA的转录水平。结合计算机图像分析技术检测不同时期子宫内膜中Ang-1/-2表达的平均光密度(AOD值)。利用SPSS11.0统计软件包进行统计学分析，以检验其间是否存在统计学差异。 结果：1.免疫组化结果显示，1)Ang-1在排卵期和分泌中期的基质细胞中及血管内皮细胞中表达，且分泌中期Ang-1的表达强，有明显的统计学差异，(P＜0.05)，而在腔上皮细胞中表达不明显。在妊娠的40天和50天，棕黄色特异性免疫反应阳性颗粒均匀分布于蜕膜细胞中；血管壁和血管内皮细胞均为Ang-1特异免疫反应阳性表达。图像处理结果示：随妊娠天数的增加，Ang-1免疫反应的平均光密度值明显增强，组间比较有显著性差异，(P＜0.01)。2)Ang-2的表达结果：Ang-2在排卵期的腔上皮细胞、腺上皮细胞、血管内皮细胞和基质细胞中表达，在分泌中期表达稍强，但无明显统计学差异，(P＞0.05)。在妊娠的40天和50天，棕黄色特异性免疫反应阳性颗粒均匀分布于蜕膜细胞、基质细胞及腔上皮细胞中；血管壁办出现阳性表达。图像处理结果示：随妊娠天数的增加，Ang-2免疫反应的平均光密度值明显增强，组间比较有显著性差异，(P＜0.01)。2.原位杂交结果显示，1)Ang-1mRNA在排卵期表达于基质细胞中，分泌中期在基质细胞、血管壁及血管内皮细胞中出现阳性表达，且表达强度增加，(P＜0.05)；Ang-1mRNA在妊娠40d及50d时表达逐渐增强，(P＜0.05)。2)Ang-2mRNA在排卵期和分泌中期明显表达于基质细胞和腺上皮，而血管壁胞浆中弱表达。但排卵期和分泌中期的表达强度无显著性差异，(P＞0.05)。但在妊娠的40d和50d时Ang-2mRNA的表达明显增强，平均光密度值具有显著性差异(P＜0.05)。 结论：在人胚胎着床过程中，Ang-1/-2在子宫内膜的表达表现出明显的时空性。提示：Ang-1/-2可能对着床过程中子宫内膜的血管新生和血管重构起着重要的作用，从而有利于胚泡成功着床；同时Ang-1/-2保持动态平衡，可能有利于严格控制滋养层细胞对母体子宫组织的侵入，使滋养层细胞的浸润在时间和空间上受到严格的限制。避免细胞滋养细胞浸润功能异常而导致异常妊娠结局。 第三部分:雌、孕激素对人子宫蜕膜细胞Angiopoietin-1/-2表达的体外调控 目的：观察雌二醇(17β-E2)、孕酮(Progestrone，P)对体外培养的人着床期子宫内膜细胞Ang-1/-2蛋白表达的影响，以研究17β-E2、P对Ang-1/-2基因表达的调节作用，从而进一步阐明Ang-1/-2在着床过程中所起的生物学作用。 方法：取妊娠40天的子宫蜕膜组织，经过细胞培养使之贴壁生长，然后分别加入17β-雌二醇(5×10-8mol/L)，孕酮(1×10-6mol/L)以及孕酮(1×10-6mol/L)+17β-雌二醇(5×10-8mol/L)于各组培养细胞中，培养12h、1d和2d。固定后运用免疫组织化学S-P法检查细胞中Ang-1/-2蛋白的表达。RT-PCR检测Ang-1/-2mRNA的表达。 结果：1)免疫组化结果：17β-雌二醇、孕酮和17β-雌二醇加孕酮三种培养基中Ang-1/-2特异性免疫反应产物均在蜕膜细胞胞浆中表达。2)RT-PCR结果：人子宫蜕膜细胞Ang-1/-2mRNA表达结果：(1)17β-雌二醇组：培养12h，17β-雌二醇使蜕膜细胞中Ang-1mRNA和Ang-2mRNA扩增产物的表达水平增强。培养1d和2d，Ang-1mRNA扩增产物的表达水平逐渐增强，但无明显的统计学意义(P＞0.05)；Ang-2mRNA扩增产物表达水平增强，有显著性差异，(P＜0.05)。(2)孕酮组：培养12h和1d，与对照组相比Ang-1mRNA扩增产物的表达水平变化不明显；培养2d后，Ang-1mRNA表达水平稍下降，(P＞0.05)。Ang-2mRNA扩增产物的表达水平与对照组相比明显增强，(P＜0.05)。(3)17β-雌二醇加孕酮组：Ang-1/-2mRNA扩增产物的表达水平与对照组相比均明显增强，(P＜0.05)。但Ang-2mRNA的扩增产物表达水平无明显叠加效应。 结论：Ang-1/-2在蜕膜中的表达受到雌、孕激素的调节，从而在着床过程中发挥着重要的作用。