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口服型生长抑素(Somatostatin,SS)基因疫苗是将pcDNA3.1-HBs/SS质粒导入减毒沙门氏菌(SL7207)中构建而成。该疫苗进入体内能迅速裂解释放质粒,表达乙肝表面抗原/生长抑素(HBs/SS)的融合蛋白,刺激机体产生SS抗体以中和SS,解除SS对生长的抑制作用,促进动物生长。该疫苗具有成本低廉、使用方便、安全性好等特点,有利于在实际生产中推广应用。本论文首先对疫苗的安全性以及细菌在体内的分布进行了检测,然后阐明了该疫苗对小鼠生长发育的影响,最后就该疫苗表达融合蛋白的情况和对肠道免疫功能的影响进行了详细研究。 口服型SS基因疫苗的安全性测定如下:30只健康的4周龄雌性小鼠,随机分为试验组Ⅰ、试验组Ⅱ和对照组。试验组Ⅰ灌胃给予疫苗茵液10~9CFU/只(CFU:菌落形成单位),试验组Ⅱ给予菌液10~8CFU/只,对照组给予200μLPBS。观察15天,1周后剖解部分小鼠。结果显示,试验组Ⅱ小鼠未见明显不良反应,剖解后内脏无明显病变。说明该疫苗在10~8CFU/只的剂量下安全性较好。 150只4周龄雌性小鼠,随机分为3个试验组。试验组Ⅰ首次免疫后2、4周分别加强免疫一次,首次免疫剂量为灌胃菌液10~8CFU/只(200μL),加强免疫剂量同首次免疫;试验组Ⅱ为首次免疫后第2、3天分别加强免疫一次,免疫剂量同试验组Ⅰ;试验组Ⅲ为对照组,口服PBS 3次,每次200μL。 减毒沙门氏菌在体内分布情况:首次免疫后8天内不同时间段各宰杀小鼠2只,采肠道和肝脾各组织进行触片,姬姆萨染色观察菌体在组织中的分布情况。结果显示,口腔灌服疫苗菌液24h内空肠中细菌数量明显增多,脾脏中在免疫后第4天发现细菌,肝脏在感染后始终未发现细菌。推测免疫后进入肠道中的细菌可能一部分被分解,一部分被肠道吞噬细胞摄取转运至次级淋巴器官后诱导局部黏膜免疫和全身免疫反应。 口服型SS基因疫苗对小鼠生长发育的影响:从首次免疫开始每周每组取10只小鼠称重,观察小鼠体重变化。结果显示,两个试验组小鼠免疫后体重有一定增加,其中试验组Ⅱ增重效果较好,但因观察时间太短,增重效果尚未达到显著水平。 口服型SS基因疫苗在体内表达融合蛋白的检测:首次免疫后于第3、5和7周每组扑杀小鼠8只,应用亲和免疫组化的方法(ABC法)分别显示十二指肠和空肠中乙肝表面抗原(HBsAg)阳性细胞和生长抑素(SS)阳性细胞的分布及数量变化。结果