【摘 要】
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目的:探讨叠氮胸苷（Zidovudine,AZT）协同三氧化二砷（Arsenic trioxide,As2O3）抑制肝癌Hep G2细胞增殖过程中,对肝癌PI3K/AKT/m TOR信号通路、EMT相关因子的影响以及Egr-1在As2O3协同AZT抗肝癌侵袭和浸润中扮演的角色,为进一步深入研究作理论支持。方法:（1）AZT（0,5,10,20,40μmol/L）单独处理肝癌Hep G2细胞72h,
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（81460456）:3’-叠氮-2’,3’-脱氧胸腺核苷通过Egr-1信号通路协同As2O3抗肝癌的分子机制研究; 研究生创新基金项目（CX2018-17）:探究As2O3协同AZT通过Egr-1抗肝癌侵袭和转移的分子机制
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目的:探讨叠氮胸苷（Zidovudine,AZT）协同三氧化二砷（Arsenic trioxide,As2O3）抑制肝癌Hep G2细胞增殖过程中,对肝癌PI3K/AKT/m TOR信号通路、EMT相关因子的影响以及Egr-1在As2O3协同AZT抗肝癌侵袭和浸润中扮演的角色,为进一步深入研究作理论支持。方法:（1）AZT（0,5,10,20,40μmol/L）单独处理肝癌Hep G2细胞72h,采用荧光定量PCR法（q-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）分别检测PI3K,AKT以及m TOR m RNA和蛋白的表达水平。（2）实验分为空白组,As2O3（2μmol/L）组,AZT（20μmol/L）组以及As2O3（2μmol/L）联合AZT（20μmol/L）组。各组肝癌Hep G2细胞处理72小时后,采用q-PCR和Western blot分别检测EMT的关键因子E-cadherin、Snail以及VIM基因和蛋白的表达水平。电转染Egr-1 si RNA并加药物干预,采用细胞划痕实验和Transwell实验检测Egr-1对肝癌Hep G2细胞侵袭和浸润产生的影响。结果:（1）通过q-PCR和Western blot检测发现,AZT干预后,和空白组相比,PI3K,AKT以及m TOR基因和蛋白的表达水平明显降低（P<0.01）。（2）通过q-PCR和Western blot检测发现,药物干预后,和空白组相比较,E-cadherin基因和蛋白表达水平明显上调,并且As2O3联合AZT药物作用效果明显高于As2O3与AZT单独处理组（P<0.01）,而Snail以及VIM基因和蛋白表达水平明显下调,As2O3联合AZT药物作用效果明显高于AZT与As2O3单独处理组（P<0.01）。干扰Egr-1表达后,划痕实验结果显示,As2O3联合AZT组肝癌Hep G2细胞平面迁移细胞数明显少于沉默Egr-1联合药物组以及空白对照组（P<0.01）。同样的,Transwell检测实验结果显示,同沉默Egr-1联合药物处理组以及空白对照组相比较,As2O3联合AZT组的肝癌Hep G2细胞趋化作用明显减弱,穿膜细胞数明显减少（P<0.01）。结论:（1）在AZT协同As2O3抑制肝癌增殖的过程中,AZT可能是通过影响PI3K/AKT/m TOR通路,协同As2O3抑制肝癌增殖。（2）As2O3联合AZT抑制肝癌细胞EMT的进程,可能与促进E-cadherin、抑制Snail与VIM的表达有关。（3）As2O3联合AZT抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,可能与影响Egr-1的表达有关。
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