【摘 要】
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传统的用于研究糖-蛋白生物大分子之间相互作用的生物芯片制备方法需要对糖或者蛋白质等目标物进行分离和纯化,不仅耗时费力,更重要的是完全改变了糖和蛋白质原有的生物环境,
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传统的用于研究糖-蛋白生物大分子之间相互作用的生物芯片制备方法需要对糖或者蛋白质等目标物进行分离和纯化,不仅耗时费力,更重要的是完全改变了糖和蛋白质原有的生物环境,无法提供完整真实的相互作用信息。而基于石英晶体微天平(QCM)的细胞芯片传感器技术能够实时、无标记的对细胞进行原位检测,从而获得细胞层面上的生物分子相互作用真实信息。目前,悬浮细胞芯片的制备方法存在固定强度弱,在连续相作用下细胞容易失活和脱落的问题。为解决上述问题,本论文采用两种策略对基于QCM的悬浮细胞芯片的制备方法进行了研究:1)利用细胞对含可点击基团修饰的非天然糖探针的生物代谢机制,将可进行点击反应的点击基团引入细胞表面,以图通过点击反应将悬浮细胞共价固定到芯片表面来制备悬浮细胞芯片;2)利用多巴胺氧化自聚反应在QCM芯片裸金表面修饰上一层聚多巴胺涂层,之后利用细胞表面氨基/巯基与聚多巴胺表面的邻苯二酚基团进行麦克尔加成反应的方法固定悬浮细胞制备悬浮细胞芯片。通过对上述两种不同方法制备的悬浮细胞芯片在连续相作用下细胞固定情况和活性的比较,最终建立了基于麦克尔加成反应共价固定细胞的QCM悬浮细胞芯片的制备工艺;采用该工艺制备了Jurkat和K562悬浮细胞芯片,通过研究细胞表面的糖基与麦胚凝集素(WGA)、伴刀豆凝集素(Con A)花生凝集素(PNA)、荆豆凝集素I(UEA-I)和大豆凝集素(SBA)之间的相互作用,对肿瘤细胞表面糖基化进行了初步探索。该研究为细胞表面糖基化的原位研究提供了一个快速高效、方便简洁的平台,对基于QCM生物传感器技术的生物大分子相互作用研究具有重要意义。
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