目的:探讨Trps1是否通过影响Akt/Creb信号通路,参与小鼠2-细胞胚向4-细胞胚发育过程,并阐明Trps1影响AKT激酶活性的具体机制,为克服体外植入前胚发育阻滞提供新思路。方法:1.小鼠植入前胚细胞收集和处理:KM小鼠（♀KM×♂KM）合笼,于h CG后18h获取并收集1-细胞胚,置于KSOM培养液中培养3h,收集具有明显雌、雄原核的1-细胞胚,分为空白对照组（KSOM培养组）,阴性对照组（negative si RNA）,Trps1-si RNA注射组,AKT激动剂回补组（Trps1-si RNA+4μg/m L SC-79）,置于KSOM培养液中继续培养。（1）观察各组1-细胞胚的后续发育情况并统计发育率;（2）利用Real-Time PCR检测各组2-细胞胚中Trps1、Akt和Creb m RNA的表达变化;（3）利用免疫荧光染色,激光扫描共聚焦显微镜观察各组2-细胞胚中TRPS1、AKT、p-AKT、CREB、p-CREB的定位及表达变化。2.卵巢癌细胞系S-KO-V3培养和处理:取出液氮罐的S-KO-V3细胞,复苏传代。培养至汇合度为70%时,将S-KO-V3细胞分为阴性对照组（negative si RNA）,Trps1-si RNA转染组,AKT激动剂回补组（Trps1-si RNA+4μg/m L SC-79）。（1）培养24h后提取细胞总RNA,利用Real-Time PCR检测各组TRPS1、AKT、CREB m RNA的表达;（2）培养48h后提取细胞总蛋白,利用Western blot技术及免疫荧光染色检测各组AKT,p-AKT,CREB,p-CREB蛋白的表达及定位变化情况。3.S-KO-V3细胞Ch IP-seq实验及验证:收集S-KO-V3细胞,利用Ch IP-seq筛选差异基因,采用KEGG通路富集方法,筛选出与CREB密切相关的信号通路以及与TRPS1结合的下游基因,并在S-KO-V3细胞系和植入前胚中加以验证。结果:1.小鼠植入前胚培养统计结果显示,1-细胞胚注射Trps1-si RNA后,2-细胞胚向4-细胞胚的过渡率显著降低（P<0.01）;与Trps1-si RNA注射组相比,AKT激动剂回补组的2-细胞胚向4-细胞胚的过渡率明显提高（P<0.01）。2.Real-time PCR结果显示,注射Trps1-si RNA能够显著降低2-细胞胚中Trps1 m RNA水平（P<0.001）,但Akt及Creb m RNA表达量未发生明显的改变（P>0.05）。Trps1-si RNA和AKT激动剂（SC-79）联合作用下,AKT及CREB m RNA表达量都有小幅度升高。免疫荧光染色结果显示,注射Trps1-si RNA后能够降低2-细胞胚中TRPS1蛋白表达水平（P<0.001）,同时也降低了p-AKT、p-CREB蛋白表达水平（P<0.001）,但AKT和CREB蛋白表达水平未见明显变化（P>0.05）。回补AKT激动剂后,p-AKT和p-CREB蛋白表达水平明显提升（P<0.001）。3.Real-time PCR结果显示,转染TRPS1-si RNA后,S-KO-V3细胞中TRPS1 m RNA表达下调,但AKT及CREB m RNA表达量未见明显变化（P>0.05）。Trps1-si RNA和AKT激动剂联合作用下,AKT及CREB m RNA表达量都小幅度升高。利用Western blot技术及免疫荧光染色检测发现,随着TRPS1蛋白水平下调,p-AKT和p-CREB蛋白水平也降低,而AKT和CREB蛋白水平保持不变;经AKT激动剂作用后,p-AKT和p-CREB蛋白表达水平明显提升。4.利用S-KO-V3细胞Ch IP-seq结果并结合KEGG通路富集分析筛选出PI3K/Akt信号通路与CREB密切相关,并进一步筛选出与TRPS1存在多个结合域的下游基因PDE4D。利用Real-time PCR及Western blot检测显示,在S-KO-V3细胞中,随着TRPS1表达量降低,PDE4D表达水平也随之降低（P<0.005）;利用免疫荧光染色检测发现,在小鼠植入前胚中,注射Trps1-si RNA后能够降低2-细胞胚中PDE4D蛋白表达水平。结论:综上,Trps1可能通过调控Pde4d转录过程,影响AKT激酶活性,从而通过Akt/Creb信号通路参与小鼠2-细胞胚向4-细胞胚发育过程。