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背景目前临床上评价糖尿病血糖控制的金标准是检测血液中HbA1c的含量,现在HbA1c有多种检测方法,例如离子交换高压液相色谱分析法、阳离子交换树脂微柱层析法、亲和色谱微柱法、免疫凝集抑制法等。但是到目前为止这些方法还没有一种能做到既准确、受干扰因素少,又经济、快速。目的根据酶联免疫吸附分析实验的原理及HbA1c的化学结构,利用针对HbA1cβ链的特异性抗原决定簇的单克隆抗体来构建竞争ELISA方法,用于检测HbA1c,并对该方法进行初步考核。方法采用简易过碘酸钠法,用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗原HbA1c,然后根据竞争ELISA原理设计直接竞争ELISA检测方法,并对检测方法的各项反应条件进行优化;将标准品稀释成8个浓度梯度,根据优化后的反应条件进行ELISA检测,以相对应标准品浓度的对数为横坐标,抑制率为纵坐标建立标准曲线,根据标准曲线得出线性回归方程及最低检测限;最后对该方法进行稳定性、精密度和准确度考核。结果用简易过碘酸钠法成功获得能与HbA1c单克隆抗体发生特异性结合反应的酶标抗原,经紫外分光光度法检测抗原的标记率为0.565,克分子比为1.755。确定的最佳实验条件为:固相载体采用紫外线照射过的美国Costar酶标板;单抗用0.05M pH9.6的碳酸盐缓冲液稀释成Ⅰ:400包被酶标板,150μl/孔,4℃24h;PBST洗涤3次,3min/次;2%BSA封闭,200μl/孔,37℃2h;洗涤;酶标抗原1:40与系列稀释的被检测物溶液各75μl,在板内竞争反应;37℃温育2h;洗涤;加入新混合的TMB底物A液和B液,150μl/孔,室温放置30min,立即每孔滴加50μl/孔2M H2SO4终止反应,用酶标仪读取各孔OD450nm值。根据上述实验步骤得出标准曲线,拟合的线性回归方程为y=37.823x-26.833（R2=0.9802）,最低检测限为16μg/ml,检测范围为16～1024μg/ml。通过评价实验得出该方法能在4℃下稳定存放6个月;板内和板间变异系数分别为2.78%、6.22%,添加回收率为96.5～100.3%,符合诊断试剂的要求。结论本研究初步建立了HbA1c直接竞争ELISA检测方法,该方法准确度及重现性好,为开发具有自主知识产权的国产化试剂盒奠定了基础。