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目的:本研究的目的是阐明自噬在骨关节病病程中的表达水平变化和其在骨关节病中的具体作用,探索Torin 1关节内注射治疗骨关节病的疗效和相应机制。方法:1.II型胶原酶关节内注射构建兔膝骨关节病模型,并给予特异性自噬抑制剂:3-MA处理。于注射开始后2、4、6、8周分别每组取6只兔子处死取标本。光镜观察软骨退变,透射电镜观察自噬体和软骨细胞退变。蛋白印记检测Beclin-1和LC3B的蛋白表达水平。2.II型胶原酶关节内注射构建兔膝骨关节病模型,并分别给予Torin 1或3-MA处理。所有动物均于注射开始后8周末处死取标本。光镜观察软骨退变,透射电镜观察自噬体和软骨细胞退变。蛋白印记检测Beclin-1和LC3B的蛋白表达水平。3.选取3月龄大白兔,双膝关节内注射胶原酶2次诱导骨关节病,伴随Torin 1关节内注射2次。在注射后8周末应用Mankin评分系统对关节软骨退变行组织学评估。透射电镜观察自噬体和软骨细胞退变。实时定量PCR检测基质金属蛋白酶-13和血管内皮因子表达水平。蛋白印记检测Beclin-1和LC3B的蛋白表达。结果:1.自噬在实验性骨关节病的早期增强而晚期减弱,3-MA抑制自噬明显加重了骨关节病中的软骨细胞和软骨退变。2.在实验性骨关节病晚期,软骨细胞和软骨退变与自噬的缺失密切相关。3-MA加重软骨细胞和软骨退变,而Torin 1激活自噬减轻二者退变。3.Torin 1关节内注射明显减少了胶原酶注射诱导骨关节病导致的软骨细胞和软骨退变。Torin 1治疗后软骨细胞内自噬体、Beclin-1和LC3B表达增加。胶原酶注射后8周Torin 1治疗降低了基质金属蛋白酶-13和血管内皮因子的表达。结论:1.本实验阐明了在骨关节病不同阶段的自噬表达水平变化,及自噬缺失对骨关节病进展的作用,表明调控自噬可能是治疗骨关节病的潜在靶点。2.自噬缺失与骨关节病晚期密切相关,且自噬在其中发挥保护作用。应用Torin 1治疗能有效抑制骨关节病病程进展,Torin 1可能是骨关节病的良好治疗药物。3.Torin 1关节内注射通过激活自噬有效减少了胶原酶诱导骨关节病导致的软骨退变,为临床治疗骨关节病提供有益的参考。