脂滴作为能量存储、调节脂质动态平衡及细胞内信号传导的细胞器,在卵母细胞成熟、受精和早期胚胎发育过程中均具有重要的作用。本研究基于猪卵母细胞内脂滴含量丰富的特点进行脂滴定量分析。猪卵母细胞内脂质主要以脂滴的形态存在,为了还原细胞的形态结构,检测脂滴数量、体积、密度和空间的分布情况,我们用Nile Red染液对脂质进行荧光染色后采用平面光密度检测方法和三维重建检测方法对脂滴进行定量。通过方法学比较,我们发现基于激光共聚焦扫描的三维重建检测方法能够更准确地对细胞内的脂滴含量进行定量分析。两种方法的准确性和重复性对比结果显示：(1)准确性：三维重建检测方法能更准确地反映样本脂滴含量变异情况(变异系数C.V.=0.86),而平面光密度检测方法C.V=0.68,三维重建检测方法的准确性更高。(2)重复性：三维重建检测方法统计猪卵母细胞内脂滴体积的ICC为0.995、0.936、0.995,平面光密度检测方法统计猪卵母细胞内脂滴总荧光强度的ICC为0.225、-3.413、0.225。针对同一细胞不同角度的重复观察,三维重建检测方法具有更好的重复性(变异系数C.V=0.07,组内相关系数ICC>0.9),而平面光密度检测方法C.V=0.37、1CC<0.4,三维重建检测方法的重复性更好。随后利用三维重建检测方法对不同发育阶段的猪卵母细胞脂滴进行定量分析,结果表明：(1)三维重建检测方法可以很好的还原猪卵母细胞内脂滴的形态、结构和空间分布情况；(2)脂滴在卵母细胞发育的初期就出现了。不同发育阶段卵母内脂滴的平均体积为：GC期(285.91 μm3)、PF期(895.61 μm3)、PRF期(1339.96μm3)、SF期(3348.04 μm3),脂滴的含量随着猪卵母细胞的发育逐级递增。AF期及MF期卵母细胞体积太大且细胞内脂滴过于密集,因此无法用本方法进行定量分析；(3)PRF期是猪卵母细胞内脂滴个数和体积显著性增加的一个关键性时期。筛选出了6个脂质相关基因,采用RT-PCR技术对AF期卵母细胞、颗粒细胞、卵泡液、肌肉、肝脏和皮下脂肪进行表达差异分析。发现AF期猪卵母细胞内PPARγ参与调控了脂质的转录,SREBP-1可能通过颗粒细胞间接参与到猪卵母细胞中脂质生成的转录。猪卵母细胞内ACC参与调控了脂肪酸的合成,甘油三酯和磷脂的合成主要依赖于卵泡液中SCD-1的调控。猪卵母细胞内脂肪酸转运相关基因LPL和aP2表达量都很低,猪卵母细胞本身脂质降解和脂肪酸转运能力很弱。以上结果揭示了不同发育阶段猪卵母细胞内脂滴的含量以及脂质发育过程中的分子调控机制,为明确猪卵母细胞脂质沉积、脂肪代谢提供基础数据。