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应用液相蛋白芯片技术筛选治疗老年性痴呆方药初探研究背景老年性痴呆即阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是目前公认的危害人类健康的主要疾病之一，已成为威胁中国老年人健康的、仅位于心脏病、肿瘤、卒中之后的第四大疾病。由于AD病理变化的复杂性，尽管世界各国在寻找AD有效治疗药物的研究中投入了大量的人力和物力，但成果却十分有限。作为天然药物的中药尤其是复方，在防治老年性疾病方面则有着丰富的理论和实践经验以及潜在的优势，因此，阐明中药复方防治AD的药理机制，筛选和研制能延缓AD进程、提高患者生活质量的中药新药将具有重要的现实意义和广阔的应用前景。目的本实验研究拟采用国内刚引进的液相蛋白芯片(Luminex)技术，研究不同治则中药复方对痴呆动物模型体内细胞因子的影响，同时结合药物治疗后痴呆动物模型学习记忆能力的变化，寻找AD生物标志物和筛选治疗AD的有效方药，为建立AD液相蛋白芯片技术平台作前期准备，为筛选新型防治老年性痴呆中药复方探索新的途径和手段，同时尝试筛选出治疗痴呆动物模型的1—2种有效方药。方法快速老化模型小鼠(senescence accelerated mouse，SAM)购自天津中医药大学第一附属医院老年脑病研究室动物中心，7月龄快速老化亚系SAM-prone／8(SAMP8)小鼠按区组随机法分为痴呆模型组、脑复康组、六味地黄汤组、四君子汤组、归脾汤组、当归芍药散组，每组14只。15只抗快速老化亚系SAM-resistant／1(SAMR1)作为正常对照组。给药4周后，进行为期6天的Morris水迷宫测试；水迷宫测试完成后，断头取出其双侧海马和皮质作为样本：用液相蛋白芯片(Luminex)技术同时测定脑组织的10种细胞因子(GM-CSF、IFNγ、TNFα、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12)含量。数据结果以(?)±s表示，用SPSS11.0统计软件对数据进行统计分析。结果1．Morris水迷宫定位航行试验结果表明，与正常对照组相比，SAM痴呆小鼠模型组的逃避潜伏期时间明显增加(P＜0.05)，游泳速度则明显下降(P＜0.05)；与模型组相比，四君子汤组、六味地黄汤组、归脾汤组的逃避潜伏期时间均明显减少(P＜0.05，P＜0.01)，四君子汤组的游泳路程明显缩短(P＜0.05)。2．在本次实验检测的SAMP8小鼠皮质匀浆液10种细胞因子指标中，与正常对照组比较，除了IL-6和IL-10有下降趋势外，其余8种细胞因子含量均呈升高趋势，但只有GM-CSF的含量明显高于正常对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)；与正常对照组比较，SAMP8小鼠海马匀浆液中所有10种细胞因子含量均呈下降趋势，除了TNFα和IL-5外，其余8种细胞因子含量均明显低于正常对照组，差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。3．六味地黄汤组、当归芍药散组和脑复康组的GM-CSF含量均与正常对照组水平接近(P＞0.05)，而四君子汤组和归脾汤组则和模型组一样，明显高于正常对照组(P＜0.05)。说明前3种药物能在一定程度上抑制SAMP8小鼠皮质GM-CSF含量的升高。从不同药物组对SAMP8小鼠海马匀浆液10种细胞因子的影响结果发现，阳性对照药脑复康能分别提高模型小鼠海马中的IFNγ、IL-4和IL-12的水平(P＜0.05，P＜0.01)；当归芍药散能分别提高模型小鼠海马中的IFNγ和IL-4的水平(P＜0.05)；四君子汤组也能提高模型小鼠海马中的IFNγ水平(P＜0.05)；而六味地黄汤组则能使模型小鼠海马中的GM-CSF、IFNγ、TNFα、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12等10种细胞因子指标全部显著升高(P＜0.05，P＜0.01)，大多恢复到正常水平。结论1．通过Morris水迷宫行为学测试，与同月龄正常小鼠SAMR1相比，9月龄SAMP8小鼠的学习记忆能力明显下降，是理想的痴呆动物模型；六味地黄汤、四君子汤、归脾汤对SAMP8小鼠的学习记忆能力都有明显的改善作用。2．9月龄SAMP8小鼠脑组织中某些细胞因子表达发生异常改变，皮质中的GM-CSF的含量明显升高，海马中的8种细胞因子含量均明显降低；SAM痴呆小鼠脑组织(尤其是海马)中的细胞因子表达的改变可能与衰老相关的神经功能紊乱或认知功能缺陷有关。3．六味地黄汤、当归芍药散、四君子汤则能在一定程度上调节SAMP8小鼠的异常免疫反应，其中六味地黄汤的作用效果最好。各用药组对SAM痴呆小鼠异常免疫状态的调节作用与改善其认知功能障碍可能有关。4．建议选择GM-CSF作为10月龄前SAMP8小鼠脑组织的主要细胞因子标志物，并作为建立AD液相蛋白芯片技术平台的候选指标；选择六味地黄汤作为防治AD相关课题进一步研究的有效方药。