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目的:针对L-精氨酸生产菌,建立基于荧光偶联单细胞微反应器超高通量筛选体系,应用于精氨酸生产菌株定向进化筛选,以提高菌株合成精氨酸产量。
方法:筛选L-精氨酸特异性氧化酶,建立精氨酸酶联荧光检测方法;基于液滴微流控技术,建立精氨酸工程菌的荧光偶联单细胞微反应器超高通量筛选体系;基于ARTP诱变方法,创建精氨酸工程菌突变库,利用单细胞微反应器超高通量筛选体系,筛选精氨酸生产量提升的突变菌株,并通过高密度发酵目标突变菌株,HPLC检测L-精氨酸高产菌株产量。
结果:一、成功建立了一种高效、灵敏的L-精氨酸酶联荧光检测体系,线性范围为5-100μM。二、基于液滴微流控技术,成功建立超高通量筛选系统,通量大、速度快,高达108/天。三、成功筛选到一株L-精氨酸高产菌,产量约8.81g/L,是出发菌株精氨酸产量的1.4倍。
结论:建立了基于酶联荧光定量-单细胞微反应器超高通量筛选体系的精氨酸高产菌株选育方法,实现了单细胞水平的工程菌超高通量筛选,相比于传统微孔板筛选方法提高了1万倍,成功应用于精氨酸工程菌突变库的筛选,并获得了L-精氨酸产量提高的突变株。
方法:筛选L-精氨酸特异性氧化酶,建立精氨酸酶联荧光检测方法;基于液滴微流控技术,建立精氨酸工程菌的荧光偶联单细胞微反应器超高通量筛选体系;基于ARTP诱变方法,创建精氨酸工程菌突变库,利用单细胞微反应器超高通量筛选体系,筛选精氨酸生产量提升的突变菌株,并通过高密度发酵目标突变菌株,HPLC检测L-精氨酸高产菌株产量。
结果:一、成功建立了一种高效、灵敏的L-精氨酸酶联荧光检测体系,线性范围为5-100μM。二、基于液滴微流控技术,成功建立超高通量筛选系统,通量大、速度快,高达108/天。三、成功筛选到一株L-精氨酸高产菌,产量约8.81g/L,是出发菌株精氨酸产量的1.4倍。
结论:建立了基于酶联荧光定量-单细胞微反应器超高通量筛选体系的精氨酸高产菌株选育方法,实现了单细胞水平的工程菌超高通量筛选,相比于传统微孔板筛选方法提高了1万倍,成功应用于精氨酸工程菌突变库的筛选,并获得了L-精氨酸产量提高的突变株。