生长激素（GH）是本世纪20年代发现的垂体分泌激素。80年代中期重组人生长激素（rhGH）开始应用于临床研究。目前发现rhGH有许多的潜在治疗作用。最近，国外曾报道，儿童或成人生长激素缺乏症患者及特发性扩张型心肌病患者，给予rhGH治疗后，可增加心肌重量、减少左室腔大小，可使病人的血流动力学、心肌能量代谢和临床状况改善。近些年来，我们在心胸外科临床上，国内率先对重症风湿性心脏瓣膜疾病、先天性心脏病等造成的心肌萎缩、心腔扩大及心肺功能不全等患者，使用了rhGH，结果表明rhGH在治疗术后疲倦综合征和促进临床恢复效果显著。但从检索到的近几年国内外文献和我们自己所作的研究来看，目前对心血管系统的研究，尚未涉及GH对心肌细胞直接作用的观察，本课题拟通过心肌细胞的培养、肥大心肌细胞模型的建立和缺氧抗损伤下心肌细胞变化的研究，从较深层次研究GH对心肌细胞的影响并探讨其机理。 本课题分两部分。 第一部分： 目的：通过肥大心肌细胞模型的建立，观察rhGH对心肌细胞的作 浙江大学博士学位论文D 用，包括形态学、电生理学、生化以及缺氧条件时的影响，从较深层次7 研究GH对心肌细胞的影响，并探讨其机理。l 方法：采用SD红皮乳鼠心肌细胞作为研究对象，设实验组和对照组，1 建立肥大心肌细胞模型。乳鼠心脏经PBS洗涤、剪碎后，在二％胰酶液I 中浸泡h次Q7C，15分钟／次人 吸出细胞块，PBS洗去胰酶，然后，l 在5％胎牛血清MEM培养液吸打至细胞悬液后经预培养2小时，再细7 胞接种。心肌细胞培养经过时效曲线和量效曲线，确立心肌细胞培养液D 更换时间为3～4天，细胞培养周期6～8天，实验组心肌细胞培养液内1 fhGH浓度为 0．SX10－＼培养增殖后的心肌细胞检测分三部分组成： l、增殖后的心肌细胞送生化检测中心，当日分别测定其培养上清 l 液和经 50 PI TriS盐酸缓冲液搅拌溶解后的乳酸脱氢酶忆DH）和磷酸 1 激酸酶比K）含量（n4 全自动生化仪人 IIZ、增殖后的心肌细胞经95％氮气巧％二氧化碳的处理，缺氧3’J’时条件下，测定其培养上清液的 LDH和 CK含量。13、M’fT法检测活性细胞增殖量。取生长良好的心肌细胞，用0．2％胰酶消化，37℃2～3分钟，加 10O胎牛血清E硼培养液，使心肌细D 胞分散悬浮，计数5X10’MI力至96孔板，每孔力细胞180。1，加hGH120pl，置 37oC，5％二氧化碳培养箱 72．J’时，然后加 MTT 4～6小时I 后置波长为570删的酶标仪（O％YS＊／”CB372）测定OD值，每l 组为 6个复孔。I 结果：11、实验组与对照组培养的心肌细胞模型在形态学及电生理学方面】存在明显差异（见图及录像人 l－2～ 浙江大学博士学位论文D 2、增殖后的心肌细胞检测 实验组与对照组的培养上清液LDH和T ＊K分别为133．42士57．26n29．33士40．70（＞0＊5）和11．9二士3．96／41．58士 3．73 （＞0．05）；经TrS盐酸液溶解后 LDH和 CK分另为 161．67士 44．94八45＊9士178 ＊2（P＜ ＊1）和4O．33土2434洱0＊8土19＊5（P＞0＊5）。 3、经缺氧条件处理，增殖后的心肌细胞实验组与对照组的培养上T 清液，＊＊H和＊R分别为218二5士叩．9针88．门土5二＊sry＜O＊01）和73．Zj 士18．95厘3．SO士12．22厌刃刀小 4、MTT法OD值实验组间与对照组在增长率上有明显的差异（见I 图）。1 结论：·D l、rhGH对心肌细胞生长有直接的作用。l 2、rhGH可提高心肌细胞在缺氧条件下的抗损伤能力，减轻缺氧状ID”况下的损伤反应。］”关键词：rhGH SD乳鼠 心肌细胞培养 LDH CK OD值 缺D 氧I 第二部分】目的：应用 GH观察 GH对体外循环下心内直视手术病人的术后疲D 倦综合征和脱离机械通气的治疗作用。资料与方法：1 资料来源：心内直视手术均采集于浙江大学医学院附属第二医院心］胸外科住院病人。rhGH组：1998年5月至2001年4月间，术后应用D，rhGH，o脏直