【摘 要】
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研究背景肺癌的发病率和死亡率在恶性肿瘤中均位居前列,而正常肺的放射性损伤和肺癌的辐射抵抗是限制肺癌放疗疗效的难题,探究放射性肺损伤和肺癌放疗疗效相关预测因子对指导临床放疗具有重要意义。研究目的研究谷胱甘肽S-转移酶P1（Glutathione S-transferase P1,GSTP1）对小鼠放射性肺损伤和肺癌放疗敏感性的影响,为临床放射性肺损伤的防治和肺癌放疗疗效预测提供新策略。研究方法（一）
【基金项目】
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军委后勤保障部卫生局保健课题（20BJZ40）； 国家老年疾病临床医学研宄中心开放项目（ZXD2004）；
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研究背景肺癌的发病率和死亡率在恶性肿瘤中均位居前列,而正常肺的放射性损伤和肺癌的辐射抵抗是限制肺癌放疗疗效的难题,探究放射性肺损伤和肺癌放疗疗效相关预测因子对指导临床放疗具有重要意义。研究目的研究谷胱甘肽S-转移酶P1（Glutathione S-transferase P1,GSTP1）对小鼠放射性肺损伤和肺癌放疗敏感性的影响,为临床放射性肺损伤的防治和肺癌放疗疗效预测提供新策略。研究方法（一）GSTP1对小鼠放射性肺损伤的防护作用研究 1、使用GSTP1-sh RNA干扰表达腺相关病毒和GSTP1过表达腺相关病毒构建肺组织GSTP1蛋白敲低和过表达的小鼠模型。 2、对小鼠进行胸部20Gy单次大剂量照射,以构建小鼠放射性肺损伤模型。 3、于照射后第1、4、8、16周分别处死小鼠,摘取全肺,计算肺系数。 4、使用H＆E、Masson、TUNEL法染色检测辐射后小鼠肺组织炎症、纤维化程度及凋亡水平。 5、脂质氧化（MDA）试剂盒检测小鼠肺脂质氧化水平。 6、Western Blot检测小鼠肺组织内上皮间质转化相关因子上皮钙黏素、神经钙粘素和波形蛋白的表达水平。 7、酶联免疫吸附实验检测辐射后小鼠血清细胞因子TGF-β1、ET-1、IFN-γ、IL-4、IL-13水平。（二）GSTP1对小鼠肺癌辐射敏感性的调控作用研究 1、使用sh RNA慢病毒构建GSTP1敲低稳转小鼠路易斯肺癌（Lewis Lung Cancer,LLC）细胞株。 2、克隆形成实验检测照射后LLC细胞存活分数。 3、流式细胞术检测照射后LLC细胞凋亡水平。 4、构建小鼠皮下荷瘤模型,并对肿瘤进行照射,记录照射后肿瘤体积变化。 5、TUNEL染色法检测照射后小鼠荷瘤的凋亡水平。 6、使用免疫荧光染色检测照射后小鼠荷瘤的肿瘤内CD4+、CD8+淋巴细胞的数量。研究结果（一）过表达GSTP1减轻辐射引起的小鼠肺损伤1、H＆E、Masson染色显示GSTP1可减轻辐射引起的肺炎和肺纤维化。2、TUNEL染色显示GSTP1可减轻辐射引起的肺细胞凋亡。3、GSTP1可减轻辐射引起的小鼠肺系数升高。4、MDA检测显示GSTP1可减轻辐射诱导的小鼠肺组织氧化损伤。5、Western Blot结果显示GSTP1可减轻辐射诱导的小鼠肺上皮间质转化。6、ELISA显示GSTP1可调节小鼠血清纤维化相关因子TGF-β1、ET-1及Th1/Th2相关细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-13的水平。（二）下调GSTP1提高体外培养的LLC细胞和小鼠荷瘤的辐射敏感性1、克隆形成实验显示下调GSTP1引起辐射后LLC细胞存活分数降低。2、流式细胞术显示下调GSTP1增加辐射后LLC细胞凋亡。3、下调GSTP1能提高辐射对小鼠荷瘤增殖的抑制效果。4、TUNEL染色显示下调GSTP1可提高照射后小鼠荷瘤凋亡率。5、免疫荧光染色显示下调GSTP1可提高照射后肿瘤内CD4+、CD8+淋巴细胞数量。结论1、过表达GSTP1减轻辐射诱导的小鼠肺损伤。2、过表达GSTP1通过抑制小鼠肺上皮间质转化和调节细胞因子水平减轻辐射诱导的小鼠肺损伤。3、下调GSTP1提高体外培养LLC细胞的辐射敏感性。4、下调GSTP1提高小鼠荷瘤的辐射敏感性。
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