黄籽菜籽蛋白酶解产物的制备及其活性研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:vensen_guo
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黄籽菜籽作为菜籽育种新品种,已有规模性种植,其压榨后的油和粕相对于黑籽菜籽,品质较高。菜籽粕中含有大量营养价值全面的蛋白质,对其蛋白质研究利用具有重大经济意义。本文以黄籽菜籽低温脱油后的黄籽菜籽粕为原料,研究了黄籽菜籽粕中各种组分含量、蛋白质组成以及碱提酸沉蛋白质工艺的优化;对得到的蛋白质进行酶解,对酶解工艺进行优化;对酶解过程中酶解产物抗氧化性和稳定性进行研究,对其组分进行初步的鉴定。主要研究结果如下:  1低温脱油黄籽菜籽粕中粗蛋白含量为41.92%、植酸和单宁分别为2.6%和0.89%、硫甙为69.22μmol/g;其中清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白分别占总蛋白的43.26%、25.63%、4.08%和14.88%;通过SDS-PAGE分析,其蛋白质组成和文献中报道的黑籽菜籽蛋白一样;通过正交试验,黄籽菜籽蛋白提取的最佳工艺为:pH为12、液料比为20、温度为30℃、提取时间为30min,提取2次,提取率能达到84.52%,在pH5下蛋白质沉淀量最大;黄籽菜籽蛋白在pH2~pH10之间溶解性和乳化性较差,在pH10~pH12之间溶解性和乳化性显著增加。  2以水解度为指标,比较得出 Alcalase酶解黄籽菜籽蛋白水解度最大,通过响应面试验得出其最佳酶解工艺为:温度58℃,pH为9,E/S为13300u/g;在该条件下,黄籽菜籽蛋白酶解0.5h、1h、2h、3h、4h时的水解度分别为10.89%、13.41%、16.03%、17.56%、18.82%,其多肽得率都在80%左右,酸沉后多肽得率也能达到65%以上。  3通过DPPH·清除率、还原能力和抑制亚油酸过氧化能力的测定, RPH4.5的抗氧化能力显著高于RPH,2h以后RPH4.5和RPH的抗氧化能力变化不大,抑制亚油酸过氧化试验中,所有酶解产物的抑制亚油酸过氧化能力均高于VE、低于BHT;通过SDS-PAGE分析,可以看出在酶解0.5h以后,蛋白质被分解成小分子物质,通过Tricine-SDS-PAGE分析,酸沉进一步去除大分子多肽和蛋白;RPH4.5的表面疏水性显著低于RPH,随着酶解时间的增加,酶解产物的疏水性呈先下降、后增加、然后又下降的趋势。  4 RPH4.5-2h在酸性条件下较稳定,随着 pH增加,其 DPPH·清除率下降;RPH4.5-2h具有较强的热稳定性,在温度≤100℃下,其 DPPH·清除率2h内维持在60%左右,说明其能通过巴氏杀菌来灭菌;通过体外模拟消化试验,表明RPH4.5-2h具有一定的抗消化稳定性,经胃蛋白酶和胰蛋白酶消化,其 DPPH·清除率能力分别能保留86.9%和91.2%,说明该产物适合经口摄入;经过氨基酸分析,RPH4.5-2h的各种氨基酸含量与黄籽菜籽蛋白的基本一致,黄籽菜籽蛋白和RPH4.5-2h中疏水性氨基酸(HAA)分别占总氨基酸的37.09%和35.38%,必需氨基酸(EAA)分别占总氨基酸的33.5%和32.26%,其中Glu、Asp、Leu和Arg含量较大;通过液质联用分析,鉴定RPH4.5-2h中含有Lys(Gly-Gly)-Leu(Ile),也可能是其混合物、Arg-Val-Lys、Arg-Phe、Phe-Ala、His-Leu(Ile)-Trp、Glu-Thr-Trp(Trp-Thr)-Arg-Glu-His(His-Glu)。
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