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抗菌肽(antibacterialpeptides,ABP)又称宿主防御肽(host defensepeptides,HDPs)或抗微生物肽(Antimicrobial peptides,AMPs),是生物体在条件性诱导下产生的具有免疫调节活性和广谱抗菌活性的一种小分子多肽,属非特异性防御系统的重要组件,几乎存在于所有生命形式如植物、昆虫、两栖动物、鱼类、鸟类、哺乳动物包括人体中。抗菌肽通常包含12～50个氨基酸,其相对分子质量处在2kDa～8kDa范围内。研究证实抗菌肽具有广谱抗菌活性,能通过趋化树突状细胞、单核细胞和记忆T细胞,成为先天性免疫和获得性免疫反应之间的重要桥梁,能够启动获得性免疫系统从而提高机体对于微生物感染的抵抗能力。Dybowskin-2CDYa(SAVGRHGRRFGLRKHRKH)是本实验室前期工作中发现并命名的天然新型林蛙皮抗菌肽,经生物信息学分析设计及改造,获得更加高效、稳定的抗菌肽AWRK6(SWVGKHGKKFGLKKHKKH)。改造肽AWRK6由18个氨基酸构成,分子量为2130.5,结构主要为α-螺旋,等电点为9.60。根据改造肽AWRK6序列,通过Touchdown Booster PCR方法获得AWRK6全长基因,以用于插入构建的的大肠杆菌——枯草芽孢杆菌穿梭表达载体,在6蛋白酶缺陷型枯草芽孢杆菌WB600中进行诱导分泌表达。通过PCR方法获得谷胱甘肽转移酶(GultathioneS Transferases,GST)作为蛋白标签,获得蔗糖果聚糖酶(Levansucrase)的启动子及信号肽序列(SacB p.s.,SacR)作为表达凋控元件,连接并转入质粒pHY300-plk,得到穿梭载体pHYSGA。转化进入蛋白酶缺陷型枯草芽孢杆菌WB600,经过PCR以及双酶切验证后进行诱导表达。表达产物在经过SDS-PAGE及Western-Blot验证后,证实获分泌型抗菌肽AWRK6表达无误,以菌液作为对象,对其抑菌效果和作为添加剂加入鸡雏饲料对生长性能的影响进行了初步研究。本文研究结论:通过构建枯草芽孢杆菌诱导型表达系统并表达抗菌肽AWRK6,抗菌肽产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有抑菌活性。对带有pHYSGA质粒的枯草芽孢杆菌WB600菌液的饲料添加效果进行了初步验证,证实其对于鸡雏的生长性能(肉料比)有显著提高作用,同时,经过对鸡雏血清的免疫指标进行ELISA测试,证明抗菌肽的添加对其免疫指标具显著的提高作用,为后续在饲料领域的应用奠定了基础。为枯草抗菌肽表达系统的饲料应用提供了一定的研究基础。