透明质酸分离纯化工艺的研究

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透明质酸(HA)是由(1-3)-2-N-乙酰氨基-2-脱氧-p-D-葡萄糖-(1-4)-O-β-D-葡萄糖醛酸的二糖重复排列而形成的直链聚合物。Meyer和Palmer在1934年首次从牛眼中提取出来。由于HA具有高粘度,高保水性和良好的生物相容性,而广泛的应用于化妆品、保健品和临床医学。透明质酸的制备方法主要有生物组织提取法和细菌发酵法。本文主要研究了从发酵液中分离纯化透明质酸的工艺。具体研究内容如下:1.研究了预处理透明质酸发酵液的方法。优化了乙醇法沉淀发酵液的条件,在发酵液中加入2.0倍体积的乙醇,HA的收率为93.75%。优化了十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法沉淀发酵液的条件,将发酵液稀释至4.5倍,调节pH=6.5,加入发酵液体积的12%的CTAB溶液(浓度以质量体积分数计为10%),此时HA收率可高达97.0%。CTAB法比乙醇法所得的HA沉淀中的杂蛋白质量分数降低了2.4%,收率提高了2.1%。但乙醇沉淀法比CTAB法可使从发酵液中粗提透明质酸时的主要原料成本少33.3%,因此若是工业生产透明质酸,还是应该采用乙醇沉淀法来沉淀发酵液来获得透明质酸粗品。2.研究了透明质酸的分离纯化工艺。将透明质酸粗品应以20g/L的浓度溶于去离子水,再加入水体积的l0-12%乙醇。加入硅藻土作为吸附剂;调节粗品溶液pH至4.6-4.8;在HA粗品溶液中加入10g/L粗硅藻土和3.3g/L,细硅藻土为助滤剂;用0.3kg/m2粗硅藻土和0.5kg/m2细硅藻土预涂层过滤;用H乙-1型滤板过滤;超滤;用乙醇沉淀得HA湿产品,经真空干燥即可得HA精品。所得HA的葡萄糖醛酸含量为40%-45.2%(理论含量为48.38%),收率为82.7~95.6%,满足化妆品级HA的要求。3.将实验室开发的透明质酸分离纯化工艺成功应用于新疆独山子石化总厂2吨/年的工业装置。该工厂生产的HA的葡醛酸含量高达40-47.3%,蛋白含量仅为0.01-0.1%,分子量为1.1-2.06×106Da,收率为≥81.7%,满足化妆品级HA的要求。4.将上述工艺生产的HA产品与目前市场上具有优势的福瑞达和东辰产品进行以下方面的比较:葡萄糖醛酸含量、蛋白含量、Na+含量、干燥失重、产品透光率、降解速度、微观结构和红外谱图。比较可知,独山子产品完全满足化妆品级HA的质量要求,完全具有与国内同种产品竞争的能力。
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