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背景: 儿童原发性肾病综合征(idiopathic nephrotic syndrome,INS)是儿童时期最常见的肾小球疾病,患儿常存在反复感染、频复发、激素耐药及依赖等难题,但具体发病机制现尚不清楚。随着糖皮质激素和免疫抑制剂在INS儿童的治疗中取得良好效果,提示INS可能是免疫因素介导的疾病。Toll样受体(toll like receptors,TLRs)是重要的天然免疫受体,它可识别病原微生物的病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),然后偶联信号转导通路,激活天然免疫细胞,同时也可为激活获得性免疫提供共刺激信号,最终引起一系列免疫应答介导的炎症反应。TLRs功能障碍可介导多种肾脏疾病发生,但在INS方面很少报道,因此,探讨TLRs在INS的发病机制十分必要。 目的: 探讨Toll样受体TLR-1、TLR-3、TLR-9在INS儿童外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中的表达及其临床意义。 方法: 清晨空腹采集INS儿童和健康对照儿童外周静脉血5ml,采用Ficoll-hypzue分离液分离单个核细胞。使用RNA提取试剂盒提取单个核细胞总RNA,应用反转录-聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测45例INS儿童治疗前(活动组)后(缓解组)和30例健康儿童(对照组)的PBMC中TLR-1mRNA、TLR-3mRNA和TLR-9mRNA的表达水平,并探讨其与血清白蛋白和胆固醇水平的相关性。 结果: 1.实验组与对照组儿童在年龄上相比,差异无统计学意义(t=-1.661,P>0.05),实验组与对照组儿童在性别上,差异无统计学意义(x2=0.009,P>0.05)。 2.TLR-1mRNA、TLR-3mRNA和TLR-9mRNA的表达及血清白蛋白、胆固醇水平:活动组INS儿童TLR-1mRNA/β-actin(2.432±0.231)表达显著高于缓解组儿童(1.675±0.627)及对照组儿童(0.512±0.228),差异均具有统计学意义(t=7.599,35.446,P均<0.05),且缓解组INS儿童TLR-1mRNA/β-actin的表达水平高于对照组儿童,差异具有统计学意义(t=9.722,P<0.05);活动组INS儿童TLR-3mRNA/β-actin(0.987±0.124)表达显著高于缓解组儿童(0.501±0.016)及对照组儿童(0.021±0.001),差异均具有统计学意义(t=26.076,42.571,P均<0.05),且缓解组INS儿童TLR-3mRNA/β-actin的表达水平高于对照组儿童,差异具有统计学意义(t=163.732,P<0.05);活动组INS儿童TLR-9mRNA/β-actin(1.965±0.952)表达显著高于缓解组儿童(1.336±0.282)及对照组儿童(0.790±0.731),差异均具有统计学意义(t=4.249,5.734,P均<0.05),且缓解组INS儿童TLR-9mRNA/β-actin的表达水平高于对照组儿童,差异具有统计学意义(t=4.541,P<0.05);活动组INS儿童血清白蛋白水平(23.62±11.67)g/L显著低于缓解组INS儿童(42.19±16.33)g/L及对照组儿童(46.88±14.80)g/L,差异具有统计学意义(t=-6.20,-7.58,P均<0.01)。活动组INS儿童血清胆固醇(9.54±2.53)mmol/L显著高于缓解组INS儿童(3.01±1.72)mmol/L及对照组INS儿童(2.89±1.66)mmol/L,差异具有统计学意义(t=14.32,12.677,P均<0.01)。缓解组INS儿童血清白蛋白和胆固醇水平与对照组相比,差异均无统计学意义(t=-1.264,0.30,P均>0.05)。 3.相关性分析:活动组INS儿童TLR-1mRNA、TLR-3mRNA和TLR-9mRNA表达水平明显上调,且与血清白蛋白水平存在负相关性,差异均具有统计学意义(r=-0.457,-0.891,-0.125,P均<0.05),与血清胆固醇水平存在正相关性,差异均具有统计学意义(r=0.445,0.911,0.872,P均<0.05);缓解组INS儿童TLR-1mRNA、TLR-3mRNA和TLR-9mRNA表达水平与血清白蛋白及胆固醇水平均无明显相关性(P均>0.05)。 结论: 1.TLR-1mRNA、TLR-3mRNA和TLR-9mRNA在INS儿童PBMC表达水平显著增高,提示TLR-1,TLR-3和TLR-9的异常活化可能参与INS的发病过程。 2.TLR-1mRNA、TLR-3mRNA和TLR-9mRNA与INS儿童血清白蛋白及胆固醇水平相关,提示TLR-1,TLR-3和TLR-9可能与儿童INS病情活动有关。