人早孕绒毛组织间充质干细胞生物学特性鉴定及其在大鼠心梗修复中作用的实验研究

来源 :苏州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:l342016022
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目的:建立人6-8周新鲜早孕绒毛组织来源的间充质干细胞(Mesenchymal stem cells derived from first-trimester chorionic villi, F-CMSCs)及足月胎盘绒毛来源间充质干细胞(Mesenchymal stem cells derived from term chorionic membrane, T-CMSCs)体外扩增体系,体外比较人F-CMSCs、T-CMSCs向多种细胞分化的潜能及形成毛细血管样结构能力。建立大鼠心肌梗死模型两周后,经开胸在左心室壁梗死区及边缘区注射人F-CMSCs、T-CMSCs,观察其改善心功能的效果,进一步研究其作用机制。方法:选取正常健康孕妇6-8周的药流术排出的新鲜早孕绒毛组织、剖腹产足月胎儿的胎盘组织,分离培养人F-CMSCs、T-CMSCs细胞,流式细胞仪检测人F-CMSCs、T-CMSCs细胞表型、特异性染色检测人F-CMSCs、T-CMSCs三系分化潜能、毛细血管形成实验检测人两群MSC细胞体外成血管能力;本实验采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型,建模成功两周后,开胸在心室壁梗死区及周围区行细胞移植。实验动物分为三组:空白对照组;T-CMSCs移植组;F-CMSCs移植组。细胞移植四周后,荧光显微镜下观察GFP+F-CMSCs细胞在大鼠局部心梗区存活情况,超声心动图检查观察大鼠心脏功能的改善情况。结果:1.流式细胞检测表明,培养的P3代人F-CMSCs、T-CMSCs均高表达CD73、CD90、CD105,不表达血系细胞标志CD14、CD34, HLA-DR,不表达滋养细胞标志CK18。2.三系分化潜能测定表明人F-CMSCs具有和人T-CMSCs相似的分化潜能,经成骨诱导后von Kossa染色可见细胞呈集落生长并出现钙结节;经成脂肪诱导,细胞内有明显的脂滴出现,油红O染色阳性;经成软骨诱导,甲苯胺蓝染色可见细胞被染成蓝色。3.流式细胞仪分析表明,体外培养的人F-CMSCs表达VEGF受体1,2即FLT-1和KDR,向内皮细胞诱导后,人F-CMSCs表达内皮细胞标志分子CD31、vWF,毛细血管形成实验表明人F-CMSCs较人T-CMSCs更易形成管网状结构;4.Masson染色结果显示:心梗区大量心肌细胞坏死,消失,被胶原纤维取代被染成蓝色,人F-CMSCs细胞移植组梗死区胶原纤维和弹性纤维均明显减少,仅在心外膜见到少量弹性纤维。5.免疫荧光显微镜观察,细胞移植4周后,局部心梗区仍有GFP+FCMSCs细胞存活。6.心超结果提示,各组相比GFP+F-CMSCs细胞移植组心脏左室舒张末内径(LVEDd)、左室收缩末内径(]LVEDs)明显减小,而心室射血分数(EF)、缩短分数(FS%)则明显升高,心功能明显改善,实验结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)人F-CMSCs具有和人T-CMSCs相似的表型及分化潜能,同时具有较强的毛细血管内皮细胞分化能力及体外成血管能力;(2)经开胸心脏梗死区及边缘区行人F-CMSCs直接移植对大鼠急性心梗死后心功能恢复效果显著。
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