蜱是继蚊子之后第二大传播媒介,可以传播多种病原。亚洲璃眼蜱（Hyalomma asiaticum）是一种体型较大的蜱种,为牛环形泰勒虫的传播媒介,可以传播Q热、斑点热及蜱媒脑炎,在我国多地都有分布,不但对养殖业造成了巨大损失,而且对人类健康构成严重威胁。miRNA是一类由内源基因编码的一段18 nt-25 nt非编码小RNA,miRNA与靶基因的结合方式主要是其种子区与靶基因3′UTR互补配对。使m RNA裂解或者阻碍其翻译过程来发挥其对靶基因的调控,从而调节各生理机能的运行。了解miRNA与靶基因在蜱体内的功能有助于更好地对蜱的生殖发育和免疫机制进行解析,为蜱和蜱传病的防控提供参考数据。本试验通过对亚洲璃眼蜱高通量测序结果筛选得到的小RNA库中,选取其中一个新预测的microRNA进行研究。通过体外扩增实验对新筛的novel miRNA-10进行验证,利用实时荧光定量PCR对其在亚洲璃眼蜱不同发育阶段,不同组织中的表达丰度进行检测。结果表明其在饥饿幼蜱和饥饿成蜱中的表达丰度较高,组织中以马氏管中的表达丰度最高,从而判断该miRNA可能对蜱的生长发育和吸血过程有关,故选取novel miRNA-10进行进一步的研究。对novel miRNA-10进行干扰实验,合成其antagomir对亚洲璃眼蜱的成蜱进行注射,并对其饱血时间、饱血体重、产卵量、产卵时间等生理指标进行统计,结果饱血体重和饱血时间较对照组有明显差异,其他生理指标较对照组差异不明显。说明novel miRNA-10对亚洲璃眼蜱的吸血时长和吸血量有影响。利用RNAhybrid 2.0软件对novel miRNA-10的靶基因进行预测,结果表明从抗增殖蛋白的ORF区预测到有结合位点。双荧光素酶报告系统检测结果显示,实验组较对照组荧光值下降了35.36%,差异极显著,体外验证了novel miRNA-10与抗增殖蛋白互为靶标。成功对抗增殖蛋白其进行了原核表达,Western Blot验证表明,表达产物具有反应原性。对表达后的蛋白透析后对兔子进行了免疫试验,免疫两只兔子,总共免疫3次,测其效价为:80000和160000,用免疫后的兔血清为一抗进行Western Blot,结果表明获得的血清为抗增殖蛋白免疫后的抗体,说明成功制备了兔子多克隆抗体。通过上蜱实验,验证了免疫后的兔子对蜱吸血有极显著的延缓作用。对亚洲璃眼蜱同时注射novel miRNA-10的antagomir和抗增殖蛋白的RNAi,结果发现亚洲璃眼蜱的饱血体重和饱血时长较单独注射antagomir-10和dsRNA PHB组均有显著的恢复,进一步从基因回补实验中验证了抗增殖蛋白为novel miRNA-10的靶基因。又对抗增殖蛋白进行RNAi,结果显示注射了si-PHB＿001和si-PHB＿002的蜱较对照组的饱血体重和饱血时长差异极显著,说明抗增殖蛋白对蜱的吸血过程有明显的影响。