【摘 要】
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梅毒是一种慢性、系统性、临床表现复杂多变且全世界流行的性传播疾病(STD),其病原体为梅毒螺旋体(Treponemapallidumsubsp.pallidum,TP)。由于梅毒螺旋体不能在体外培养,且通过
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梅毒是一种慢性、系统性、临床表现复杂多变且全世界流行的性传播疾病(STD),其病原体为梅毒螺旋体(Treponemapallidumsubsp.pallidum,TP)。由于梅毒螺旋体不能在体外培养,且通过兔子传代培养提取的天然梅毒螺旋体和别的螺旋体又有交叉反应,为提高检测的敏感性和准确性,目前用基因重组抗原来进行梅毒的血清学筛查。
本文选取了TPP17,TPP47,TP0453和TP0183四个主要的编码梅毒螺旋体抗原的序列为目的基因,通过PCR扩增,分别定向克隆到pGEX-KG载体中构建出重组质粒,然后转化至大肠杆菌(E.coli)Rosetta菌株中用IPTG诱导表达并利用SDS-PAGE和Western---Blot进行分析鉴定重组蛋白。
扩增结果表明成功获取了目的基因,通过PCR检测和双酶切鉴定重组质粒得到大小一致的目的条带,测序表明插入片段为目的基因,经BLAST比对和GeneBank登录序列一致。SDS-PAGE表明重组蛋白rTPP17,rTPP47,rTP0453和rTP0183分子量和预期一致,Western---Blot检测结果表明上述四种重组蛋白和梅毒病人阳性血清有特异性反应,可以用于血清筛查。
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