分枝杆菌噬菌体L5 LysA、LysB的表达及活性研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:xbalr
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分枝杆菌噬菌体是侵染分枝杆菌的病毒。在治疗分枝杆菌所致疾病方面具有一定的研究及开发价值,同时它也是研究分枝杆菌遗传学的工具。近些年,因抗生素的大量使用,细菌耐药性的产生和传播也越来越严重,人们对其关注也逐渐增多,而噬菌体裂解酶作为一种既不易产生耐药性,又具有独特作用的抗菌剂备受人们青睐。LysA和LysB为分枝杆菌噬菌体L5的两种细胞内溶素,具有裂解酶的特性,具备作为抗菌剂的潜力。本研究通过原核表达获得了纯化的LysA和LysB,并对其酶学性质进行了初步研究:1、采用常规方法,扩增出分枝杆菌噬菌体L5的lysA基因(1431bp)和lysB基因(1029bp),成功构建克隆载体pMD19T-lysA和pMD19T-lysB。预测表明LysA、LysB均有信号肽,为分泌蛋白;LysA全长477aa,有2个α螺旋,7个β折叠,有溶解酶活性;LysB全长343aa,具有6个α螺旋,6个β折叠,有脂肪酶活性。2、采用pET-28a表达载体用大肠杆菌成功表达出56.09kDa的LysA和41.32kDa的LysB,LysA、LysB均以包涵体形式存在。优化最适诱导条件为:37℃,1.0mmol/L IPTG诱导6h。LysB具有脂肪酶活性。
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