【摘 要】
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目的构建CD59分子配体肽(sp22)基因真核表达重组体系,探讨sp22基因对细胞CD59分子表达及功能的影响,为进一步研究sp22分子与CD59分子的作用机制及利用短肽封闭CD59分子表达,
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目的构建CD59分子配体肽(sp22)基因真核表达重组体系,探讨sp22基因对细胞CD59分子表达及功能的影响,为进一步研究sp22分子与CD59分子的作用机制及利用短肽封闭CD59分子表达,为肿瘤基因靶向治疗开辟新途径。方法构建含特异性sp22基因的真核重组表达载体sp-pIRES,脂质体法转染人前列腺癌PC-3细胞,G418筛选建立稳定转染细胞系,RT-PCR检测转染细胞中sp22基因mRNA的表达并筛选阳性细胞克隆,RT-PCR检测转染细胞表面CD59mRNA表达量的变化,Western Blot、ELISA竞争抑制试验检测转染细胞CD59蛋白的表达；制备抗CD59多克隆抗体,台盼蓝染色试验和LDH试验检测sp22分子对CD59分子功能的影响,MTT法测定PC-3细胞增殖抑制率。结果PCR、双酶切及DNA测序鉴定表明成功构建了sp-PIRES真核重组表达载体；RT-PCR试验证实sp22在spPC-3细胞中成功表达；Western Blot、ELESA竞争抑制试验表明：spPC-3细胞比正常PC-3细胞CD59蛋白表达量减少,二者比较其差别有统计学意义(P<0.05)；与正常PC-3细胞相比,补体对spPC-3细胞的溶解杀伤能力明显增强,二者比较其差别有统计学意义(P<0.05); MTT结果测定spPC-3细胞与正常PC-3细胞相比较细胞增殖抑制率增高,差别有统计学意义(P<0.05)。结论sp22基因可在mRNA及蛋白水平抑制人前列腺癌PC-3细胞表面CD59蛋白分子的表达及功能,降低CD59分子抗补体活性,为进一步研究利用SP22阻断CD59分子在肿瘤细胞上的表达创造了有利条件,为肿瘤的免疫治疗研究奠定基础。
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