【摘 要】
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目的:通过“生物活性追踪法”对牛蒡根氯仿提取物进行分离提取,并对得到的抗肿瘤活性组分进行机制探讨。方法:牛蒡根氯仿提取物经硅胶柱层析分离得到不同组分。用S180细胞、K562细胞、NCI-H1975和MCF-7细胞经MTT法筛选出活性组分;流式细胞术和Western blot分析活性组分对K562细胞的周期及凋亡的影响,检测凋亡相关基因,确定其诱导凋亡途径;小鼠脾淋巴细胞转化实验探究活性组分对小鼠
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目的:通过“生物活性追踪法”对牛蒡根氯仿提取物进行分离提取,并对得到的抗肿瘤活性组分进行机制探讨。方法:牛蒡根氯仿提取物经硅胶柱层析分离得到不同组分。用S180细胞、K562细胞、NCI-H1975和MCF-7细胞经MTT法筛选出活性组分;流式细胞术和Western blot分析活性组分对K562细胞的周期及凋亡的影响,检测凋亡相关基因,确定其诱导凋亡途径;小鼠脾淋巴细胞转化实验探究活性组分对小鼠免疫能力的影响;MTT法确定活性组分存在对耐药细胞株K562/02的逆转多药耐药作用;细胞划痕法观察活性组分对NCI-H1975细胞划痕愈合率的改变,评价其对细胞运动迁移能力的影响;Transwell细胞小室法,观察透膜阳性细胞数量,评价活性组分对NCI-H1975细胞侵袭能力影响。结果:牛蒡根氯仿提取物提取分离鉴定后得到甾体类组分(L-1)、三萜类组分(L-2)、组分L-3和组分L-4四个组分。各组分对S180细胞均显示很强的细胞毒作用,其IC50值均在10μg/mL以下。对NCI-H1975细胞的IC50值分别为137.95、260.95、245.03 和>500μg/mL;对MCF-7细胞的IC50分别为282.76、140.32、>500、和>500μg/mL;而K562细胞对甾体类组分(L-1)和三萜类组分(L-2)敏感度较高,IC50值分别为204.50μg/mL和117.56μg/mL;三萜类组分(L-2)将K562细胞G0/G1期比例由对照组的45.52%增加到了 53.82%,而K562细胞S期的比例由对照组的45.68%减少到了 37.11%(均P＜0.05);甾体类组分(L-1)和三萜类组分(L-2)分别将K562细胞凋亡率由5.1%增加至21.8%和38.0%(均P＜0.01);Western blot分析结果显示随着甾体类组分(L-1)和三萜类组分(L-2)浓度加大,可以使NCI-H1975细胞caspase-3活化逐渐增加,前体物质不断减少。抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量明显下调,同时促凋亡蛋白Bax的表达量明显上调,加速了细胞凋亡;四个组分中三萜类组分(L-2)对小鼠淋巴细胞存在一定促进增殖的趋势,其他组分均对淋巴细胞存在抑制作用;甾体类组分(L-1)与阿霉素合用后K562/02细胞耐药指数由1165降低至468(P<0.01),其他组分没有证实存在逆转耐药作用;划痕实验证明各组分使NCI-H1975细胞的划痕愈合能力和迁移能力明显降低(P<0.05)。且甾体类组分(L-1)和三萜类组分(L-2)较其余组分作用尤为显著。各组细胞移行愈合率分别为对照组:30.32±1.10%、组分L-4组:23.58±1.01%、组分L-3组:23.06±2.07%、甾体类组分(L-1)组:16.08±2.86%和三萜类组分(L-2)组:15.99±2.09%。细胞侵袭实验表明在一定浓度的各组分作用下透膜细胞较对照组明显减少(P<0.05)。各组透膜阳性细胞数分别为对照组:52.00±7.24、组分L-4组:36.00±5.40、甾体类组分(L-1)组:27.00±4.90、组分L-3组:25.20±9.66和三萜类组分(L-2)组:18.80±3.54,与对照组相比(P<0.05)。结论:通过溶剂提取、硅胶柱层析分离并采用体外筛选方法确定其活性较高的组分为甾体类组分和三萜类组分,并从细胞周期测定、免疫调节、逆转耐药和抑制细胞侵袭能力等方面初步验证了牛蒡根氯仿提取物各组分的抗肿瘤作用。
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