丰都红心柚落果柚皮素的制备及其纳米乳的构建研究

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柚皮素属于二氢黄酮类化合物,广泛存在于芸香科植物中,因具有抗氧化、抗癌、消炎和预防骨质疏松等生理功能而受到关注。天然植物中柚皮素含量极低,需通过水解柚皮苷来大量制备。丰都红心柚落果是一种田间废弃物,其柚皮苷含量远高于成熟果,是制备柚皮素的理想原料。使用丰都红心柚落果制备柚皮素,可实现资源综合利用,减少环境污染。由于柚皮素水溶性和脂溶性均较差,口服生物利用度低,其在食品和医药等领域的应用受到限制。纳米乳作为一种新型药物载体,可提高难溶性物质的溶解度和生物利用度,近年来已有广泛应用。本文使用丰都红心柚落果为原料,以柚皮素得率和柚皮苷水解为指标,通过酸解法制备柚皮素,并利用正交实验优化最佳工艺条件。以丰都红心柚精油和中链甘油三酯为油相,通过自乳化法制备柚皮素纳米乳,研究油相浓度和表面活性剂浓度等对乳液平均粒径、多分散指数(PDI)和外观的影响。考察了最优配方制备的柚皮素纳米乳在不同环境因素下粒径的变化和贮藏稳定性。此外,通过体外释放和模拟胃肠液考察了柚皮素纳米乳在体外的释放规律和消化作用。主要研究结果如下:1.建立了同时测定柚皮苷和柚皮素的高效液相色谱法。确定高效液相色谱条件为:流动相1%冰乙酸(A)-甲醇(B),梯度洗脱(0~25 min,38%B;25~55 min,38%~45%B;55~60 min,45%~38%B);进样量:20μL;流速:1 m L/min;紫外检测器;检测波长283 nm。绘制柚皮苷和柚皮素标准曲线分别为Y=0.9065X-3.7168,R~2=0.9992;Y=0.5653X-0.0118,R~2=0.9997,线性相关性良好。2.酸解法制备柚皮素并通过正交实验进行工艺优化。考察了制备工艺中各因素:酸解温度、酸解时间、盐酸质量分数和液料比对柚皮素得率和柚皮苷水解率的影响。在单因素试验的基础上,选取上述四个因素通过正交实验进行工艺优化。得出对柚皮素得率的影响大小为:酸解温度>酸解时间>盐酸质量分数>液料比,优化的工艺条件为:酸解温度110℃、酸解时间1.5 h、盐酸质量分数为3.5%、液料比为25:1(m L:g),在此条件下柚皮素得率为42.39%,柚皮苷水解率为99.31%。3.通过低能乳化法制备了柚皮素纳米乳液,并优化了工艺配方。以丰都红心柚精油和中链甘油三酯为油相,吐温80和司盘80为表面活性剂,去离子水为水相,通过自乳化法制备了柚皮素纳米乳。研究了油相成分、油相浓度、表面活性剂成分和表面活性剂浓度对纳米乳粒径、PDI和外观的影响。最终优化得到的配方为:红心柚精油与MCT比例为5:5,油相浓度为10%,吐温80与司盘80比例为8:2,表面活性剂浓度为10%。4.研究了柚皮素纳米乳的体外释放情况和消化作用。结果表明,与对照组柚皮素溶液相比,柚皮素纳米乳表现出较好的缓释作用。柚皮素溶液在8 h时已基本释放完全,12 h后释放基本趋于停滞。而柚皮素纳米乳则持续缓慢释放,在24 h仅达到60.68%的累积释放率,表明其具有一定的缓释效果。通过模拟人体胃肠液,研究了柚皮素纳米乳的消化作用。在模拟胃液中,柚皮素纳米乳表现出良好的稳定性,其粒径和PDI均在较小范围内变化增长,柚皮素的保留率呈现缓慢下降的趋势。在模拟肠液中,纳米乳的粒径和PDI出现大幅增长,稳定性较差。随着乳液的不稳定,柚皮素的保留率也快速下降。5.探究了最优配方制备的柚皮素纳米乳对小鼠成骨细胞的作用。在细胞毒性实验中,低浓度纳米乳组(1-10μg/L)对细胞活力无显著影响。在两高浓度组(100、1000μg/L)下,纳米乳对细胞生长分别有11%和17%的抑制效果。总体来说,该纳米乳在实验浓度范围内毒性低,安全可用。在纳米乳对成骨细胞骨钙素分泌的影响研究中发现,纳米乳组比同柚皮素含量标品组具有更高的骨钙素浓度。6.考察了柚皮素纳米乳的稳定性。研究环境因素对纳米乳粒径和多分散指数的影响,结果表明该纳米乳在不同温度、p H值、盐离子浓度和糖浓度下能够保持稳定。将柚皮素纳米乳放置于不同的贮藏温度(4、26、37℃)下考察其贮藏稳定性。总体来说,37℃的高温贮藏条件对纳米乳有显著的影响,4℃和25℃比较利于乳液的稳定,适合作为贮藏温度。
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