目的:通过收集慢性牙周炎的临床样本,研究布鲁顿酪氨酸激酶Btk(Bruton’s tyrosine kinase)在慢性牙周炎临床样本组织中的基因及蛋白表达情况,为进一步探讨Btk在慢性牙周炎中的作用及慢性牙周炎治疗提供参考依据。方法:收集慢性牙周炎的临床样本,通过实时荧光定量PCR和Western Blot方法,检测Btk的基因及蛋白表达情况。(1)临床样本采集选取2018年1月至2019年6月期间于我院就诊,年龄在21至59岁之间的患者30名。初诊诊断为中、重度慢性牙周炎,经牙周基础治疗后效果不佳,需行牙周手术的患者15例,为实验组;第三磨牙因阻生需接受翻瓣拔除术但牙周健康的患者15例,为健康对照组。告知患者本次研究的目的和内容,经患者知情同意签字。以上研究获得我院伦理委员会批准。根据人民卫生出版社《牙周病学》第4版和1999年牙周国际研讨会牙周病分类标准要求,记录各项临床检查指标的情况。实验组病例纳入标准为:中、重度慢性牙周炎行牙周翻瓣手术的牙龈组织,有牙周袋及形成(袋深>5mm),CAL>3mm;GI≥2,PLI≥2,BOP(+);影像学显示牙槽骨有吸收,牙槽骨吸收>根长1/3。健康对照组病例纳入标准为:第三磨牙阻生齿翻瓣拔除手术的牙龈组织,CAL=0;(2)GI=0,PLI=0,BOP(-);影像学显示无牙槽骨吸收;无其他口腔疾病,近一个月内未服用抗炎类药物。(2)采用实时荧光定量PCR方法,检测Btk的基因表达情况;采用Western Blot方法,检测Btk的蛋白表达情况。随机选取12例实验组和12例健康对照组,进行实时荧光定量PCR实验;余下3例实验组和3例健康对照组,进行Western Blot实验。将上述牙龈组织统一进行充分研磨,提取样本组织RNA,测量RNA浓度,将RNA逆转录成c DNA,检测牙龈组织中Btk在m RNA水平的表达情况;按Western Blot实验操作要求处理样本,制胶,进行蛋白质浓度测定及蛋白变性,SDS-PAGE电泳,分析实验组与健康对照组Btk条带的OD值和分子量,检测Btk在蛋白水平的表达情况。所有实验结果进行收集与整理,进行统计学分析。结果:1.临床样本收集情况符合病例纳入要求的实验组患者共15例,其中有8例男性和7例女性,年龄23至59周岁;健康对照组共15例,其中有9例男性和6例女性,年龄21至49周岁。2.实时荧光定量PCR检测结果实时荧光定量PCR检测结果显示,在实验组和健康对照组牙龈组织中,Btk均有表达,但实验组牙龈组织中Btk的表达高于健康对照组,两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。3.Western Blot检测结果Western Blot检测结果显示,在实验组和健康对照组牙龈组织中,Btk均有表达,但实验组牙龈组织中Btk的表达高于健康对照组,两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Btk在人慢性牙周炎中有表达,提示Btk可能参与了慢性牙周炎的疾病过程,但其在慢性牙周炎中的具体功能作用有待进一步研究。