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背景和目的:非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一种非酒精摄入介导的肝脏异常脂质沉积的临床病理综合征。在NAFLD疾病谱中,非酒精性脂肪性肝炎(N ASH)是单纯性脂肪肝(NAFL)向肝纤维化发展最关键的病理环节。肝内巨噬细胞极化改变和肝星状细胞(HSCs)活化在此过程中发挥重要调节作用。本研究拟通过动物模型及细胞实验,观察NAFL和NASH时肝内巨噬细胞极化改变和HS Cs活化与肝内炎症、纤维化的相关性,探讨PPAR-γ与NASH发展过程中肝内巨噬细胞极化和HSCs活化的相关性及对肝内炎症-纤维化的影响,并通过调控P PAR-γ表达探讨其对LPS联合脂肪酸诱导的巨噬细胞极化改变和成纤维细胞活化的影响。方法:分别以高脂饮食和胆碱蛋氨酸缺乏饮食喂饲建立NAFL和NASH小鼠模型,部分NASH模型小鼠予PPAR-γ激动剂罗格列酮灌胃4周。肝组织病理学染色检查肝脏脂肪变性、炎症及纤维化程度;免疫组织化学观察巨噬细胞极化表型、数量以及HSCs活化状态和数量;Real-time PCR及Western Blot检测肝组织PPAR-γ基因及炎症、纤维化相关基因的m RNA和蛋白的表达;CBA检测血清炎症因子水平。分别以饱和脂肪酸(SFAs)和多不饱和脂肪酸(PUFAs)或联合LPS孵育RAW264.7巨噬细胞株和NIH/3T3成纤维细胞株,并予PPAR-γ激动剂/拮抗剂孵育,Real-time PCR检测巨噬细胞极化表型和成纤维细胞活化相关基因的m RNA的表达。结果:(1)NAFL和NASH时肝内总巨噬细胞数量均明显增多,且以M1型极化的巨噬细胞增多为主,活化的HSCs数量也均明显增多,NASH时两者增加更为显著。并且NASH时肝内单核细胞源性巨噬细胞数量明显增加。(2)在NASH进展过程中,随着肝脏炎症和纤维化的加剧,以M1型极化为主的肝内总巨噬细胞数量逐渐增多,并且以单核细胞源性的巨噬细胞数量增多为主,活化的HSCs细胞数量也逐渐增多。而肝组织内PPAR-γm RNA及蛋白表达量逐渐降低。(3)PPAR-γ激动剂罗格列酮治疗后肝脏炎症、纤维化和脂肪变性明显减轻,肝内总巨噬细胞及M1型巨噬细胞减少而M2型巨噬细胞增加,并且单核细胞源性的巨噬细胞减少,活化的HSCs也显著减少,而肝组织PPAR-γm RNA及蛋白表达量增加。(4)饱和脂肪酸PA主要诱导巨噬细胞M1型极化,多不饱和脂肪酸DHA主要诱导巨噬细胞M2型极化,脂肪酸联合LPS均诱导以M1型极化为主的巨噬细胞M1/M2型混合极化;PPAR-γ激动剂可使脂肪酸或脂肪酸联合LPS诱导的巨噬细胞M1型极化减弱而M2型极化增强,反之,PPAR-γ拮抗剂可使脂肪酸或脂肪酸联合LPS诱导的巨噬细胞的M1型极化增强并使M2型极化减弱。脂肪酸或脂肪酸联合LPS均能促进成纤维细胞的活化,PPAR-γ激动剂可使这种活化作用减弱。结论:(1)肝内以M1型为主的巨噬细胞极化和HSCs的活化始于NAFL,并在NASH发展中加剧。(2)肝内巨噬细胞和HSCs的表型和活性变化与肝脏炎症、纤维化密切相关,并与PPAR-γ表达变化相关。(3)PPAR-γ激动剂通过抑制巨噬细胞M1型极化和HSCs活化改善肝脏炎症和纤维化。(4)不同种类脂肪酸或联合LPS对巨噬细胞极化和成纤维细胞活化具有不同影响,调控PPAR-γ表达可以改变巨噬细胞极化表型和成纤维细胞活性。