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猪胰激肽释放酶(以下简称胰K)的提取纯化方法很多,常见的有硫酸铵沉淀法、离子交换层析法、有机溶剂分级、亲和层析法等。目前,国际上基于胰K的纯化研究大多采用阴离子交换结合阳离子交换最后加一步凝胶过滤层析,并且离子交换过程中胰K洗脱都采用改变pH的方式,由于缓冲液的缓冲作用,使得柱内pH改变缓慢,周期延长,耗费大量缓冲液,如法国Graham S. Bailey的纯化过程,虽然经过三步纯化后胰K比活高达1254u/mg,可是收率只有28.4%;其次有采用离子交换层析与疏水层析结合或者离子交换层析与亲和层析相结合,步骤较多、纯化周期较长且成本也较高,如英国Talal S. EI. Thaher的纯化过程,虽然收率达到87%,但胰K比活只有156.3u/mg。本文将盐析技术与疏水相互作用层析技术(Hydrophobic interaction chromatography, HIC)相结合进行胰K的分离提纯,这种组合有利于前后工艺的衔接,缩短了操作时间,节省了洗脱缓冲液,使胰K能够保持较高活性且得到了较高的回收率。 由于疏水层析需要在较高盐浓度条件下进行操作,而本实验中经过盐析处理后的上清液中盐浓度较高,可以直接作为疏水层析进料,不需要额外的处理步骤,因此将盐析与疏水层析技术结合使得纯化步骤更加简易、快速。疏水层析处理过程中,通过综合比较Butyl Sepharos-FF,Octyl Sepharose FF,Phenyl Sepharose FF这三种疏水介质,最终选用了Butyl Sepharose FF,该介质疏水性适中,可以保证温和条件下洗脱胰K。该过程采用的纯化策略是先以高盐缓冲液平衡层析柱使胰K吸附,然后通过逐级降低缓冲液盐浓度的方式使胰K蛋白