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研究目的:根据2020年全球癌症统计报告,肺癌仍是当前中国人群中发病率和死亡率最高的肿瘤。其中,肺腺癌（LUAD）仍是最常见的病理类型,占总发生率的50%以上。且由于不同地区的肿瘤筛查条件限制,使得LUAD一经查出,往往已经达到中晚期,这导致LUAD的五年生存率仍保持在10-20%的低值,中位生存期仅为8-10个月,并造成了高昂的经济和社会负担。随着分子生物技术和相关数据库的不断完善,越来越多的长链非编码RNA（LncRNA）被证明参与肿瘤的发生发展过程,从转录和翻译水平对靶基因进行调控。因此,寻找新型LncRNA,阐明其在分子生物学层面的作用,有助于更加深入了解LUAD的发生机制,寻找更有效的预测和治疗标靶,对肿瘤诊断和临床治疗具有重要的作用。研究方法:1.新型lncRNA的筛选与检测本课题组基于先前研究的成果,通过对四组LUAD样本与其附近的正常肺组织进行测序分析,鉴定出了 18组表达异常的基因。其中,长链非编码RNA RP3-340N1.2（ENST00000417884.1）在高通量增殖试验（HCS）中表现出了对细胞增殖的显著影响。我们通过qRT-PCR法检测RP3-340N1.2在肺腺癌细胞系和正常肺上皮细胞系的表达差异。2.探究RP3-340N1.2对LUAD细胞系的影响在本实验中,我们通过Wound healing实验检测RP3-340N1.2对细胞迁移能力的影响;MTT和平板克隆形成实验检测RP3-340N1.2对细胞增殖和克隆能力的影响;Transwell、Invasion实验探究RP3-340N1.2对癌细胞的迁移、侵袭能力;流式细胞术检测RP3-340N1.2对癌细胞的凋亡和细胞周期的影响。3.探究RP3-340N1.2的作用机制通过生物信息学工具筛选出可能与RP3-340N1.2存在机制相关性的下游靶点:miR-134-5p和EGFR,通过双荧光素酶基因报告实验和qRT-PCR实验验证RP3-340N1.2 与 miR-134-5p 竞争性结合;Westren blot 实验验证 RP3-340N1.2对下游EGFR的调控。4.探究RP3-340N1.2在临床LUAD患者血清中的存在情况及意义通过qRT-PCR实验检测LUAD患者血清中RP3-340N1.2的存在情况;探究LUAD患者血清中RP3-340N1.2的表达情况与各个临床因素的关系;并分析RP3-340N1.2是否可以作为一种分子生物学标志物为LUAD的诊断提供参考。实验结果:1.对新型lncRNA的筛选和检测结果（1）LncRNARP3-340N1.2在高通量增殖试验（HCS）中表现出了对细胞增殖显著的影响。（2）QRT-PCR实验结果表明RP3-340N1.2在肺腺癌细胞系中高表达。2.RP3-340N1.2对LUAD细胞系影响的研究结果（1）Wound healing实验结果表明抑制RP3-340N1.2,细胞的迁移能力下降。（2）MTT和平板克隆形成实验表明抑制RP3-340N1.2后,细胞的增殖能力受到了抑制。（3）Transwell和Invasion实验结果显示RP3-340N1.2促进细胞的转移和侵袭能力。（4）流式细胞术实验结果显示RP3-340N1.2影响细胞的周期,并抑制细胞凋亡。3.RP3-340N1.2的作用机制的研究结果（1）qRT-PCR和双荧光素酶基因报告实验结果表明RP3-340N1.2与miR-134-5p可能存在竞争性结合。（2）Westren blot实验表明RP3-340N1.2可能间接调控EGFR水平。4.RP3-340N1.2在临床LUAD患者血清中存在情况及意义的研究结果（1）qRT-PCR检测表明,LUAD患者组血清中RP3-340N1.2的表达量明显高于健康对照组,差距具有统计学意义。（2）RP3-340N1.2在LUAD患者血清中的表达情况与肿瘤分化程度和疾病分期有明显相关性,而与其他亚组,包括年龄、性别、吸烟、肿瘤大小、淋巴结转移情况和远端转移情况不显示统计学上的相关性。（3）LUAD 患者血清中 RP3-340N1.2 的 AUC 为 0.648（95%CI:0.459-0.838）,当取约登指数最大临界值0.436时,其敏感度和特异度分别为0.650和0.786,认为其可以为临床实践提供参考价值。结论:本研究筛选出一种新型lncRNARP3-340N1.2,在LUAD细胞系中高表达;RP3-340N1.2对LUAD细胞的增殖、克隆、转移能力有促进作用,抑制LUAD细胞凋亡,影响LUAD细胞周期;机制上,RP3-340N1.2与miR-134-5p竞争性结合,间接正向调控EGFR的表达;临床样本研究中,RP3-340N1.2在LUAD患者血清中高表达;表达情况与患者的临床疾病分期和病理分化程度存在相关性;血清中RP3-340N1.2的表达对LUAD的诊断有重要的参考意义。这些发现表明RP3-340N1.2在LUAD中具有致癌作用,并阐明了其一种可能的致病机制,可以作为一种分子生物学标志物,在肿瘤的防治中具有重要意义。