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目的:百合作为我国卫生部审批通过的首批药食两用的植物,在临床和生活中有着广泛的应用,对百合多糖的提取和分离纯化也有部分报道,但总的来说,对多糖的研究往往倾向结构分析,工艺常常被忽略。
大理地区盛产百合,本实验旨在通过对大理地区百合多糖的提取工艺的研究,寻找并建立最佳的大理地区百合多糖提取工艺。奠定了大理百合多糖提取的实验方法学基础,为云南省生物资源的开发积累实验资料。
方法:本研究采用了正交实验对提取温度、提取时间、溶剂体积和提取次数等工艺参数进行优选。对浓缩比和乙醇加量进行实验,筛选出最佳的大理地区百合多糖分离的乙醇沉淀工艺。从蛋白质清除率和多糖损失率两方面对传统的蛋白质去除方法Sevag法和三氯醋酸法进行了比较。用Sephadex G-200凝胶柱层析和醋酸纤维薄膜电泳分析精制百合多糖的组分,用薄层层析方法分析百合多糖的单糖组成。
结果:最佳提取条件为:温度60℃,固液比1:8,浸提时间7小时,浸提次数2次。在此最佳条件下,进一步研究了多糖分离的乙醇沉淀工艺,发现浸提液浓缩比和乙醇加量对多糖沉淀率有影响,最佳条件是:当浓缩液:浸提液=1:3,乙醇加量为4倍浓缩液体积时,沉淀率最大,达到87.45%,多糖含量为17.13%。
采用传统的Sevag法和5%三氯乙酸法去除百合粗多糖中蛋白类成分,并从蛋白质清除率和多糖损失率两方面进行比较,结果为Sevag法的蛋白质清除率为87.67%、多糖损失率为28.47%,5%三氯乙酸法的蛋白质清除率为88.35%、多糖损失率为38.34%,因而确定采用Sevag法去除蛋白质。
精制百合多糖进行了Sephadex G-200凝胶柱层析,结果得到两个洗脱峰。进行了醋酸纤维素薄膜电泳,结果得到两条区带。进行了酸水解百合多糖的薄层层析,结果显示此百合多糖主要由葡萄糖组成,未检测到阿拉伯糖、甘露糖、和半乳糖。
结论:通过研究建立了一套可用于百合多糖的提取、纯化工艺,进行了大理地区百合多糖的提取。结果表明:新鲜百合原料(多糖含量为:6.79%),经乙醇抽提、热水浸提(多糖含量为:14.47%),再浓缩、重复醇沉、Sevag法除蛋白质、乙醇沉淀、透析、再乙醇沉淀、洗涤、干燥得精制百合多糖(多糖含量为82.9%)。
精制百合多糖经Sephadex G-200凝胶柱层析和醋酸纤维素薄膜电泳分析,均显示存在两个组分,说明本研究精制百合多糖主要含有两种多糖组分,并且这两种多糖中的单糖残基存在修饰基团。进行了酸水解百合多糖的薄层层析,结果显示此百合多糖主要由葡萄糖组成,是否含有其它单糖有还待进一步研究。